【摘要】：腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)是腦內(nèi)廣泛存在的一種蛋白質(zhì),由腦組織合成,主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng),尤以上丘腦、海馬、大腦皮層和紋狀體部位含量最高。BDNF在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中起重要作用,能夠維持多種神經(jīng)元的存活、分化及生長發(fā)育,并促進受損神經(jīng)元的恢復與再生對突觸間經(jīng)典遞質(zhì)的釋放有增強作用,影響神經(jīng)元的可塑性。研究發(fā)現(xiàn),BDNF含量和分布的變化與很多神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機制有很大關(guān)系,且向腦內(nèi)補充外源性BDNF對神經(jīng)退行性疾病有治療作用。血腦屏障(Blood-brain barrier, BBB)主要由腦毛細血管內(nèi)皮細胞(Brain Micro vascular Endothilial Cells, BMECs)及其之間的緊密連接組成,若外源性物質(zhì)要通過BBB必須滿足兩個條件：1)分子量必須小于500Da；2)脂溶性高。由于BDNF屬于大分子陽離子蛋白質(zhì),外源性BDNF很難通過血腦屏障而發(fā)揮作用,因此,如何將外源性BDNF蛋白轉(zhuǎn)運入腦仍是一項挑戰(zhàn)。迄今為止,克服BBB的中樞系統(tǒng)給藥方法包括兩類：其一是侵入性給藥方法；包括腦內(nèi)定位注射、腦室內(nèi)或海馬穿刺給藥、腦部移植工程化細胞等,然而該類方法因其缺點：藥物很快被組織清除、不易擴散、濃度梯度大、技術(shù)要求高、風險大等而不能應(yīng)用于臨床。其二是非侵入性給藥方法；該類方法通過載體的介導將生物大分子轉(zhuǎn)運入腦,其具有高效、低毒、安全、方便等優(yōu)點。 將蛋白質(zhì)或多肽載體與外源性大分子物質(zhì)通過基因工程的方法連接,在工程菌中表達融合蛋白,可以實現(xiàn)載體協(xié)助大分子物質(zhì)進行入腦轉(zhuǎn)運�？袢《咎堑鞍�(rabies virus glycoprotein, RVG)具有嗜神經(jīng)性,能夠攜帶其他物質(zhì)向中樞神經(jīng)系統(tǒng)轉(zhuǎn)運。序列分析顯示, RVG上的189-214和330-357氨基酸序列是病毒與神經(jīng)元連接的關(guān)鍵部位,我們將330-357這段序列與含九個精氨酸的膜轉(zhuǎn)導肽(cell penetrating peptides, CPPs)通過3個甘氨酸連接后形成RVG衍生肽(RVG-derived peptide, RDP (KSVRTWNEIIPSKGCLRVGGRCHPHVNGGGRRRRRRRRR)). RDP能夠攜帶多種大分子蛋白質(zhì)穿過血腦屏障并發(fā)揮生物學作用。本文試圖通過基因工程的方法將RDP基因與BDNF基因融合并在大腸桿菌中誘導表達,將融合蛋白經(jīng)尾靜脈注射入小鼠體內(nèi),通過ELISA法檢測RDP介導的BDNF蛋白在小鼠體內(nèi)的分布,采用Morris水迷宮的方法探究RDP-BDNF對東莨菪堿所致認知障礙模型小鼠的作用,并研究其作用機理。實驗結(jié)果表明,重組的RDP-BDNF能夠跨血腦屏障并發(fā)揮其神經(jīng)營養(yǎng)活性,能改善東莨菪堿誘導的認知功能障礙小鼠的學習記憶能力,其作用機制可能與提高認知障礙模型小鼠腦內(nèi)BDNF水平,從而增強膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的功能及維持氧化應(yīng)激狀態(tài)平衡有關(guān)。
【學位授予單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R965

【參考文獻】

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本文編號：2567525