【摘要】：間尼索地平(m-nisoldipine)[化學(xué)名稱(chēng):1,4-二氫-2,6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-3,5-吡啶二羧酸甲酯異丁酯]是由河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院首次合成的一類(lèi)新型二氫吡啶類(lèi)藥物,存在一個(gè)手性中心,可拆分為兩個(gè)不同的光學(xué)對(duì)映體(R,S-m-nisoldipine)。間尼索地平與尼索地平(nisoldipine)為同分異構(gòu)體,藥理活性相當(dāng),但光穩(wěn)定性較優(yōu),主要用于高血壓和心臟病的防治。前期實(shí)驗(yàn)表明,間尼索地平原型藥物排泄較少,主要以代謝物形式排出體外,并且目前主要研究其對(duì)映體在血液中代謝物情況,對(duì)于其在腸道菌群中代謝研究較少,故有必要對(duì)這方面展開(kāi)實(shí)驗(yàn),為臨床研究提供依據(jù)。肝臟作為藥物代謝的重要器官,是多數(shù)代謝反應(yīng)的發(fā)生場(chǎng)所,CYP450酶是參與藥物代謝反應(yīng)的重要酶類(lèi),并容易被藥物誘導(dǎo)或抑制,了解藥物與CYP450酶的作用關(guān)系能夠?yàn)樗幬镒饔脵C(jī)制研究提供理論依據(jù)。以往研究已證明外源性藥物對(duì)CYP450酶的誘導(dǎo)主要是經(jīng)核受體PXR介導(dǎo)的,間尼索地平在此方面的相關(guān)研究尚屬空白,因此有必要對(duì)其此方面進(jìn)行研究。本試驗(yàn)應(yīng)用UPLC-Q-TOF-MS技術(shù),采用大鼠腸道菌群液溫孵體系,對(duì)間尼索地平代謝途徑及其代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,為進(jìn)一步理解其作用機(jī)制提供依據(jù)和技術(shù)支持。采用RT-q PCR技術(shù),以大鼠作為研究對(duì)象,系統(tǒng)分析了在不同劑量下,長(zhǎng)期給予間尼索地平對(duì)CYP450酶五種亞型的影響。利用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng),建立h PXR介導(dǎo)的CYP450酶的藥物誘導(dǎo)劑體外篩選體系,考察間尼索地平對(duì)映體對(duì)CYP450酶的誘導(dǎo)作用機(jī)制。本研究旨在預(yù)測(cè)間尼索地平與其它藥物相互作用,并指導(dǎo)臨床合理用藥。第一部分基于UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)的大鼠腸道菌轉(zhuǎn)化間尼索地平對(duì)映體的體外代謝研究目的:建立腸道菌轉(zhuǎn)化研究間尼索地平對(duì)映異構(gòu)體代謝產(chǎn)物的方法,確定代謝物的結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)化途徑。方法:將R,S-間尼索地平分別與大鼠腸道菌于體外厭氧溫孵培養(yǎng)2 h,用正己烷-乙醚(1:1)萃取,離心后取上清液氮?dú)獯蹈?復(fù)溶后進(jìn)行UPLC-Q-TOF-MS分析。色譜條件:采用Poroshell 120 EC-C18色譜柱(2.1mm×100 mm,2.7μm)色譜柱,以0.05%甲酸水-乙腈為流動(dòng)相,梯度洗脫,流速400μL·min-1,柱溫40℃;質(zhì)譜條件:電噴霧離子源(ESI源),負(fù)離子模式檢測(cè)。比較樣品和相應(yīng)的菌空白、藥物空白的數(shù)據(jù),檢測(cè)推斷其代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。結(jié)果:在對(duì)映體溫孵液中檢測(cè)到原藥及其3種代謝產(chǎn)物:1,4-二氫-2,6-二甲基-4-(3-氨基苯基)-3,5-吡啶二羧酸異丁基甲酯、1,4-二氫-6-甲基-4-(3-硝基苯基)-3,5-吡啶二羧酸異丁基甲酯和1,4-二氫-2,6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-3,5-吡啶二羧酸二甲酯,并推斷MNS的腸道菌轉(zhuǎn)化途徑。結(jié)論:間尼索地平在腸道菌從中發(fā)生生物轉(zhuǎn)化而形成代謝產(chǎn)物,對(duì)映體的代謝產(chǎn)物種類(lèi)相同,代謝途徑主要為還原和氧化反應(yīng)。第二部分基于RT-q PCR技術(shù)的間尼索地平對(duì)CYP450酶活性的影響目的:研究間尼索地平對(duì)大鼠CYP450酶CYP1A2,CYP2B,CYP2C11,CYP2D,CYP3A1亞型的影響。方法:將SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組,間尼索地平低、中、高劑量組(2.5,5.0,12.5 mg·kg-1)。各組大鼠每天灌胃給藥一次,連續(xù)灌胃15天后處死,并用RT-q PCR技術(shù)定量分析大鼠肝組織中CYP1A2,CYP2B,CYP2C11,CYP2D,CYP3A1的m RNA表達(dá)水平。結(jié)果:與對(duì)照組比較,間尼索地平能下調(diào)CYP1A2,CYP2B,CYP2D m RNA的表達(dá),可以上調(diào)CYP2C11,CYP3A1 m RNA的表達(dá),并且呈顯劑量-效應(yīng)關(guān)系,低和高劑量組m RNA的表達(dá)水平有顯著性差異。結(jié)論:間尼索地平對(duì)CYP450酶各亞型m RNA水平有調(diào)節(jié)作用,提示間尼索地平可能通過(guò)影響CYP450酶對(duì)其它藥物的代謝發(fā)揮作用。第三部分間尼索地平對(duì)映體對(duì)h PXR介導(dǎo)的CYP450酶的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用機(jī)制研究目的:建立h PXR介導(dǎo)的CYP450酶的藥物誘導(dǎo)劑體外篩選體系,考察R,S-間尼索地平對(duì)CYP450酶的誘導(dǎo)是否由h PXR介導(dǎo)。方法:利用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng),將包含h PXR蛋白識(shí)別和結(jié)合調(diào)控元件的CYP2B6、CYP2C9和CYP3A4啟動(dòng)子序列插入報(bào)告基因上游,將表達(dá)載體和報(bào)告載體共轉(zhuǎn)染Hep G2細(xì)胞,分別用9.7、2.425和1.2125μg·m L-1的R,S-間尼索地平處理48 h后裂解細(xì)胞進(jìn)行雙熒光素酶活性檢測(cè)。結(jié)果:R,S-間尼索地平實(shí)驗(yàn)組與0.1%DMSO溶媒對(duì)照組存在差異(P0.05)。R-間尼索地平可以通過(guò)h PXR誘導(dǎo)CYP2B6、CYP2C9和CYP3A4的表達(dá)。S-間尼索地平可以通過(guò)h PXR誘導(dǎo)CYP2B6和CYP2C9的表達(dá),但是對(duì)CYP3A4沒(méi)有影響。結(jié)論:該研究成功構(gòu)建h PXR介導(dǎo)的CYP450酶藥物誘導(dǎo)劑的體外篩選體系,R,S-間尼索地平通過(guò)激活h PXR介導(dǎo)了CYP450酶的表達(dá)上調(diào),并表現(xiàn)出劑量-效應(yīng)關(guān)系。
【圖文】：

圖 2 空白樣品Ⅰ（A）、空白樣品Ⅱ（B）、樣品（C）的總離子流圖Fig.2 Representative total ion chromatograms (TIC) of rat intestinal florasamples by UHPLC-Q-TOF/MS in (A) the blankⅠsample, (B) the blank Ⅱsample, (C) incubated sample

18圖 3 R,S-間尼索地平的主要裂解途徑Fig.3 The main proposed fragmentation pathways of R,S-m-nisoldipine
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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1 周盛會(huì);湯浩;;中藥調(diào)節(jié)細(xì)胞色素P450酶活性的方法學(xué)研究概述[J];中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志;2016年11期

2 陳鑫;韓霜;臧素綱;楊萍燦;汪曉鶯;周玉貴;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)血清miR-7方法的建立及臨床初步應(yīng)用[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2016年06期

3 聞志彬;張明理;;松葉豬毛菜干旱脅迫下實(shí)時(shí)定量PCR內(nèi)參基因的篩選[J];植物生理學(xué)報(bào);2015年11期

4 張?jiān)蒲?徐王彥君;湯響林;馬增春;王宇光;梁乾德;譚洪玲;肖成榮;王振中;蕭偉;高月;;熱毒寧注射液對(duì)大鼠肝臟CYP450酶的影響[J];中國(guó)中藥雜志;2015年14期

5 黃銘珊;金霆;;探討實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)血液新生隱球菌的臨床意義[J];實(shí)用檢驗(yàn)醫(yī)師雜志;2015年01期

6 苑霖;賈佩佩;孫宇鵬;張曉旭;張智勇;張?zhí)m桐;;間尼索地平對(duì)映體在人肝微粒體中的酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究[J];藥物分析雜志;2014年12期

7 韋忠紅;朱智杰;劉玉萍;劉兆國(guó);盛曉波;汪思亮;陶麗;祝娉婷;陳文星;王愛(ài)云;陸茵;;TNF-α 3'-UTR雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)的構(gòu)建及丹參酮類(lèi)藥物篩選[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2015年01期

8 李敏;綦國(guó)紅;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在食源性致病菌檢測(cè)中的應(yīng)用[J];中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng);2014年08期

9 汪永保;余慶;李映志;李洪波;葉春海;;菠蘿蜜實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析中內(nèi)參基因的篩選[J];熱帶作物學(xué)報(bào);2014年07期

10 康志杰;崔嵩;李莉;高貝貝;黃丹;陳雪瑜;高源;楊巖;閆金松;;急性早幼粒細(xì)胞白血病PML/RARα融合基因篩查及實(shí)時(shí)定量檢測(cè)平臺(tái)的建立[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2014年07期

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1 董洋洋;實(shí)時(shí)熒光PCR對(duì)牛肉中摻入鴨肉和豬肉的定量檢測(cè)研究[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2016年

2 常延超;L-型電壓依賴(lài)性鈣通道α_1亞單位在兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞基質(zhì)代謝中的作用及其機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 胡東莉;硝苯地平對(duì)人孕烷X受體介導(dǎo)的CYP2B6和CYP2C9的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用的研究[D];中南大學(xué);2013年

4 孔德志;間尼索地平質(zhì)量控制與藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

5 景秀娟;間尼索地平的質(zhì)量控制和體內(nèi)外代謝研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

6 李敏;間尼索地平光學(xué)異構(gòu)體的手性拆分與藥代動(dòng)力學(xué)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

7 陳丹;人血液循環(huán)DNA的定量檢測(cè)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2007年

8 王雪;（Rac）-間—尼索地平、（S）-間—尼索地平和（R）-間—尼索地平藥理效應(yīng)的比較[D];河北醫(yī)科大學(xué);2007年

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本文編號(hào)：2565560