【摘要】：目的觀察鹽酸吡格列酮(Pioglitazone, PIO)對(duì)高糖培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞(Mesangial Cells, MCs)P38絲裂原活化蛋白激酶(P38mitogen-activated proteinkinase, P38MAPK)及其介導(dǎo)的氧化應(yīng)激的影響，探討其腎保護(hù)機(jī)制，，為糖尿病腎臟病變的防治提供新思路。 方法體外培養(yǎng)大鼠腎小球MCs，隨機(jī)分為正常對(duì)照(NG)組、高糖(HG)組、P38MAPK抑制劑SB203580干預(yù)(S)組、吡格列酮低濃度(P1)組、吡格列酮高濃度(P2)組。48h后分別收集細(xì)胞及上清液。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(Reactive oxygen species, ROS)水平； Western blot測(cè)定磷酸化P38MAPK(phosphory1ated P38MAPK, p-p38)、P38MAPK、p22phox、p47phox蛋白含量；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription polymerase chain reaction, RT-RCR)檢測(cè)細(xì)胞還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate,NADPH)氧化酶亞基p22phox、p47phox mRNA表達(dá)；采用比色法檢測(cè)MCs上清液中的超氧化物歧化酶(superoxide Dismutase, SOD)、過(guò)氧化氫酶(catalase, CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平。 結(jié)果 1各組大鼠腎小球MCs ROS水平的比較 與NG組相比，高糖刺激48h后，HG組細(xì)胞內(nèi)ROS生成量增多(P0.05)。SB203580和PIO預(yù)先干預(yù)后，細(xì)胞內(nèi)ROS生成量顯著降低(P0.05)。 2各組大鼠腎小球MCs P38MAPK磷酸化程度的比較 HG組p-p38水平較NG組顯著增高(P0.01)。與HG組比較，S組、P1組和P2組P38MAPK磷酸化水平明顯降低(P0.05)。但各組間總P38MAPK表達(dá)無(wú)明顯變化。 3各組大鼠腎小球MCs p22phox、p47phox蛋白表達(dá)量的比較 Western blot結(jié)果顯示，NG組MCs可低水平表達(dá)p22phox、p47phox，高糖刺激48h，p22phox、p47phox蛋白表達(dá)量顯著增加(P0.01)。而SB203580和PIO均可減少高糖介導(dǎo)的p22phox、p47phox高表達(dá)(P0.05)。 4各組大鼠腎小球MCs p22phox、p47phox mRNA的比較 與NG組相比，高糖培養(yǎng)48h后MCs p22phox、p47phox mRNA表達(dá)上調(diào)(P0.05)。SB203580和PIO均可顯著抑制高糖介導(dǎo)的p22phox、p47phox mRNA高表達(dá)(P0.05)。 5各組大鼠腎小球MCs上清液中SOD、CAT活性和MDA水平的比較 HG刺激后，SOD和CAT活性明顯下降，MDA含量明顯升高(P0.01)，經(jīng)SB203580和不同濃度PIO干預(yù)，SOD和CAT活性不同程度升高，MDA含量減少(P0.05)。 6相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，大鼠腎小球MCs內(nèi)p-p38水平與ROS水平、MDA含量正相關(guān)(P 0.01)，與SOD、CAT活力呈負(fù)相關(guān)(P 0.05)。此外，ROS水平與p22phox、p47phox蛋白表達(dá)水平正相關(guān)(P 0.01)。 結(jié)論高糖刺激后大鼠腎小球MCs的ROS產(chǎn)生增多，P38MAPK磷酸化程度增加，p22phox、p47phox mRNA及蛋白表達(dá)增加，上清液中SOD活性、CAT活性下降、MDA含量顯著增高；PIO可通過(guò)抑制P38MAPK活化減輕HG誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激水平，且呈濃度依賴性，該作用可能與其腎臟保護(hù)部分有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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1 Desirée Luis-Rodríguez;Alberto Martínez-Castelao;José Luis Górriz;Fernando de 嚶lvaro;Juan F Navarro-González;;Pathophysiological role and therapeutic implications of inflammation in diabetic nephropathy[J];World Journal of Diabetes;2012年01期

本文編號(hào)：2564608