發(fā)布時間：2019-11-09 15:33

【摘要】：目的： 作為血管的保護傘，血管內皮細胞能使組織液和血液通過它完成物質代謝，而且血管內皮細胞也能產生并分泌生物活性物質用來調節(jié)凝血與抗凝平衡及血壓等特殊功能，進而使血液流動正常和血管長期通暢。同型半胱氨酸能夠使心血管疾病的發(fā)病率升高，這跟它誘導血管內皮細胞的損傷有關。作為一種降糖藥物，二甲雙胍被研究發(fā)現(xiàn)，可以使乳腺癌與心血管疾病的發(fā)病率降低，本實驗旨在探討二甲雙胍能否降低同型半胱氨酸對血管內皮細胞的損傷及其可能存在的機制。 方法： ①觀察不同溶度同型半胱氨酸（Hcy）作用血管內皮細胞后對細胞活性的影響將實驗分為正常組、Hcy組，血管內皮細胞接種24小時后進行藥物處理。Hcy組分別用250μM、500μM、1000μM及2000μM溶度的Hcy處理細胞24小時；用CCK-8試劑盒檢測Hcy處理后的各組血管內皮細胞活性。 ②觀察不同濃度二甲雙胍（Metformin）作用血管內皮細胞后對細胞活性的影響將實驗分為正常組、Merformin組，血管內皮細胞接種24小時后進行藥物處理。Merformin組分別用250μM、500μM、1000μM及2000μM溶度的Merformin處理細胞24小時；用CCK-8試劑盒檢測Metformin處理后的各組血管內皮細胞活性。 ③構建Hcy的血管內皮細胞損傷模型探討Merformin的干預作用及其機制將實驗分為正常組，Hcy組，Merformin組，Hcy+Merformin組。細胞接種24小時后藥物處理。Hcy組加入1000μM溶度的Hcy，Merformin組加入1000μM溶度的Merformin，Hcy+Merformin組同時加入1000μM溶度的Hcy及1000μM溶度的Merformin，然后共同作用24小時。對各組進行以下方面檢測：CCK-8檢測各組血管內皮細胞活性，測定血管內皮細胞內乳酸脫氫酶（LDH）、總超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活性和微量丙二醛（MDA）水平，qRT-PCR測定NADPHmRNA、SODmRNA及CATmRNA的表達，WesternBlot測定p-AMPKα及t-AMPKα蛋白的表達。 結果： （1）血管內皮細胞活性 ①與正常組比較，各溶度Hcy組血管內皮細胞活性低(P0.05)，且隨著Hcy濃度的增加，血管內皮細胞活性下降。 ②與正常組比較，各溶度Merformin組血管內皮細胞活性無明顯變化(P0.05)，且內皮細胞活性與Merformin濃度無關。 ③與正常組比較，Hcy組細胞活性低(P0.05)，Merformin組對細胞活性無明顯影響(P0.05)，而Hcy+Merformin組較Hcy組細胞活性高(P0.05)。 （2）乳酸脫氫酶(LDH)活性 與正常組比較，Hcy組的細胞LDH活性高(P0.05)，Merformin組的細胞LDH活性無明顯差異(P0.05)，Hcy+Merformin組LDH活性比Hcy組低(P0.05)，Merformin能降低Hcy導致的LDH活性的升高。 （3）細胞內總SOD活性 與正常組比較，Hcy組的細胞總SOD活性低(P0.05)，Merformin組的細胞總SOD活性無明顯差異(P0.05)。Hcy+Merformin組總SOD活性比Hcy組高(P0.05)，Merformin能緩和Hcy導致的總SOD活性的降低。 （4）丙二醛(MDA)的生成水平 與正常組比較，Hcy組細胞MDA的生成水平高(P0.05)，Merformin組的細胞MDA的生成水平無明顯差異(P0.05)。Hcy+Merformin組細胞MDA的生成水平生成水平比Hcy組低(P0.05)，Merformin能降低Hcy導致的細胞MDA的增加。 （5）谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）活性 與正常組比較，Hcy組的谷胱甘肽過氧化物酶活性低(P0.05)，Merformin組的細胞谷胱甘肽過氧化物酶活性無明顯差異(P0.05)。Hcy+Merformin組谷胱甘肽過氧化物酶活性比Hcy組高(P0.05)，Merformin能緩和Hcy導致的谷胱甘肽過氧化物酶活性的降低。 （6）NADPHmRNA的表達量 與正常組比較，Hcy組的細胞NADPHmRNA的表達量高(P0.05)，Hcy+Merformin組細胞NADPHmRNA的表達量比Hcy組低(P0.05)，Merformin能降低Hcy導致的細胞NADPHmRNA的表達量的升高。 （7）SODmRNA的表達量 與正常組比較，Hcy組的細胞SODmRNA的表達量低(P0.05)，Hcy+Merformin組細胞SODmRNA的表達量比Hcy組高(P0.05)，Merformin能緩和Hcy導致的細胞SODmRNA的表達量的降低。 （8）CATmRNA的表達量 與正常組比較， Hcy組的細胞CATmRNA的表達量低(P0.05)，Hcy+Merformin組細胞CATmRNA的表達量比Hcy組高(P0.05)，Merformin能緩和Hcy導致的細胞CATmRNA的表達量的降低。 （9）p-AMPKα及t-AMPKα蛋白的表達量。 與正常組比較，各實驗組的t-AMPKα蛋白的表達量無明顯差異(P0.05)；與正常組比較，Hcy組的p-AMPKα蛋白的表達量無明顯差異(P0.05)，Merformin組及Hcy+Merformin組的p-AMPKα蛋白的表達量升高(P0.05)。Merformin使細。胞內p-AMPKα/t-AMPKα的比值升高，從而使AMPKα的磷酸化水平升高。結論： ①同型半胱氨酸能使血管內皮細胞的活性降低，且隨著同型半胱氨酸的增加，對血管內皮細胞的活性影響越大，其影響內皮細胞活性降低與誘導細胞內氧自由基、MDA、LDH、NADPH等水平或活性上升，而使細胞內抗氧化酶SOD、CAT、GSH-PX等活性降低有關。 ②Merformin對血管內皮細胞活性無明顯影響(P0.05)，且內皮細胞活性與Merformin濃度無關。 ③二甲雙胍可以降低同型半胱氨酸對內皮細胞的損傷，可能的機制是通過激動AMPK通路，使磷酸化的AMPK增加，從而緩和同型半胱氨酸誘導的細胞內氧自由基、MDA、LDH、NADPH等水平或活性上升，抗氧化酶SOD、CAT、GSH-PX等活性降低。
【圖文】：

倒置顯微鏡下觀察，EC304 細胞貼壁生長，，單個細胞形態(tài)可呈現(xiàn)三角形、梭型為主，細胞漿為透明、細胞核圓型，細胞生長融合后呈現(xiàn)鋪路石樣（圖 1）。當細胞鋪滿 90%左右瓶底用含 EDTA 胰酶進行 1：3 傳代。細胞傳代后大約 40 分鐘開始貼壁，大約 6-8 小時貼壁完全，剛貼壁時為圓形，約 12 小時成為梭形或多角形。36 小時后可長滿 80%瓶底。

純二甲雙胍作用 24 小時后，CCK-8 檢測細胞活性。%，其余各組細胞活性與正常組比較百分比為：，500 μM 組為 98.5±4.02%，1000 μM 組為 101.6±3.0.27%。通過統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，各濃度組與正常組比較細度無關（P>0.05）（見圖 3）。
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R96

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 王建華;李清;胡玉堂;;二甲雙胍對高血壓合并2型糖尿病患者血壓及血脂的影響[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志;2008年24期

2 王紅;楊春紅;瑪依拉;;二甲雙胍對糖耐量減低患者血清炎癥標志物的影響[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2008年06期

本文編號：2558538