【摘要】：目的:本研究利用肝素前體K5多糖連接抗腫瘤藥物阿霉素(doxorubicin,DOX)制備具有p H敏感特性的K5多糖-阿霉素前體藥物(K5-DOX),并在體外對其理化性質和活性進行評價。方法:通過希夫堿反應制備K5-DOX,對DOX負載量、K5-DOX在溶液中的形貌和體外藥物釋放等性質進行了考察。通過人宮頸癌He La細胞對其體外細胞攝取和細胞毒性進行評價。結果:成功制備K5-DOX,DOX含量為17.4%。藥物釋放研究發(fā)現(xiàn),K5-DOX在p H 5.0酸性條件下DOX的釋放速率遠高于生理p H 7.4時DOX的釋放速率,具有p H響應性。納米粒子表面帶負電荷,在含10%胎牛血清(FBS)溶液中表現(xiàn)出可拮抗血清的優(yōu)良特性。細胞攝取結果表明,K5-DOX可迅速被細胞攝取,且其細胞攝取率遠高于游離阿霉素。體外細胞毒性結果表明,K5-DOX具有良好的抗腫瘤活性。結論:結果表明,K5-DOX是一種具有潛在應用價值的抗腫瘤前體藥物,K5多糖有望成為新一代藥物載體。
【圖文】：

胞接種至96孔培養(yǎng)板，細胞密度7000個/孔在37℃，CO2(5%)飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。加入各受試藥物(溶于含10%FBS的細胞培養(yǎng)基中)，繼續(xù)培養(yǎng)48h后每孔加入0．5mg·mL－1MTT溶液100μL，37℃培養(yǎng)4h，吸出上清液，用100μLDMSO溶解沉淀物，使用酶標儀在570nm處檢測吸光度(A)。細胞存活率=(Asample/Acontrol)×100%。結果1K5-DOX的合成K5多糖先通過高碘酸氧化，使部分含鄰位羥基的葡萄糖酸環(huán)氧化開環(huán)，得到醛基化K5多糖。之后利用醛基與DOX上的氨基反應得到酸敏感的希夫堿(圖1)，制備得到K5-DOX。圖1K5-DOX的合成路線所得產(chǎn)物K5-DOX通過1HNMＲ譜進行表征，如圖2所示。與K5多糖相比，K5-DOX中K5多糖的峰仍存在，在7．5～8．0ppm處出現(xiàn)DOX結構中苯環(huán)上的H的峰，證明已成功制備得到K5-DOX。根據(jù)DOX標準曲線計算得到K5-DOX中DOX的含量為17.4%，相當于約100個K5雙糖單位中連接14個DOX分子。K5-DOX水溶液于4℃冰箱中放置3個月后仍澄清，無沉淀產(chǎn)生，說明K5-DOX具有良好的穩(wěn)定性。圖2K5多糖(D2O)與K5-DOX(DMSO-d6)的核磁共振氫譜2K5-DOX納米粒子的制備及表征由于K5多糖具有良好的水溶性，而連接至K5多糖的DOX分子結構中的蒽環(huán)具有疏水性，因此K5-DOX可表現(xiàn)出兩親性，在水溶液中可通過疏水作用力自組裝形成納米粒子。透射電鏡結果表明，形成的納米粒子為邊緣模糊的球狀納米粒子，并且具有良好的分散性、尺度均一，平均粒徑約為40nm，如圖3所示。納米粒子的粒徑大小影響其微粒的分散穩(wěn)定性以及在體內的分布，，K5-DOX納米粒子的粒徑通過動態(tài)光散射(DLS)進行測定，如圖4所示。從結果中可以看出，K5-DOX在水溶液中組裝得到的納米粒子的平均粒徑為180．4nm，PDI=0.174，表明其具有較窄的粒徑分布。粒徑?

形成的納米粒子為邊緣模糊的球狀納米粒子，并且具有良好的分散性、尺度均一，平均粒徑約為40nm，如圖3所示。納米粒子的粒徑大小影響其微粒的分散穩(wěn)定性以及在體內的分布，K5-DOX納米粒子的粒徑通過動態(tài)光散射(DLS)進行測定，如圖4所示。從結果中可以看出，K5-DOX在水溶液中組裝得到的納米粒子的平均粒徑為180．4nm，PDI=0.174，表明其具有較窄的粒徑分布。粒徑儀所測納米粒子在水溶液中的粒徑大于透射電鏡測得的粒徑，這可能是透射電鏡樣品制備過程中納米粒子干燥導致納米粒子表面親水層塌陷和納米粒子皺縮所致。圖3K5-DOX納米粒子的透射電鏡圖
【作者單位】： 江南大學藥學院;
【基金】：教育部博士點基金(20110093110008) 江蘇省自然科學基金(BK2012557) 武漢大學生物醫(yī)用高分子材料教育部重點實驗室開放基金(20110401)
【分類號】：R979.1

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本文編號：2551422