【摘要】：組胺H1受體拮抗劑被用于治療某些過敏性疾病,如鼻炎、蕁麻疹和過敏性皮炎。本文采用無標(biāo)記細(xì)胞整合藥理學(xué)技術(shù)建立了組胺H1受體拮抗劑高通量篩選模型。應(yīng)用基于共振波導(dǎo)光柵的動態(tài)質(zhì)量重置分析方法檢測了已知的激動劑和拮抗劑作用于A431細(xì)胞上內(nèi)源性H1受體后所產(chǎn)生的特征信號,獲取特征信號譜,建立組胺H1受體拮抗劑篩選模型。進(jìn)而應(yīng)用此模型篩選了32個天然產(chǎn)物對組胺H1受體的拮抗活性。結(jié)果表明,無標(biāo)記DMR分析適合于H1受體拮抗劑的高通量篩選;在篩選的32個化合物中,從亞貢中分離得到的內(nèi)酯類化合物為活性較強(qiáng)的拮抗劑。上述結(jié)果表明,無標(biāo)記DMR分析可能成為組胺H1受體拮抗劑發(fā)現(xiàn)的新方法。
【圖文】：

M，2倍稀釋，19個濃度梯度)分別加入已接種A-431細(xì)胞的Epic湟384孔生物感應(yīng)器微型板中，在Epic湟系統(tǒng)上監(jiān)測30min，得化合物DMＲ響應(yīng)曲線。第二步:加入同一濃度組胺后繼續(xù)監(jiān)測30min，得組胺DMＲ響應(yīng)曲線。2．1．1組胺H1受體激動劑引起的DMＲ響應(yīng)信號組胺在A-431細(xì)胞上能夠引起DMＲ響應(yīng)信號，且呈劑量依賴性，，EC50為1．29μM;以不同濃度的組胺預(yù)處理后再加入同一濃度的組胺，組胺的DMＲ響應(yīng)信號被抑制，預(yù)處理時(shí)組胺的濃度越高第二步組胺的DMＲ響應(yīng)信號被抑制的越明顯，呈劑量依賴性，IC50為0．59μM(圖1)。這說明A-431細(xì)胞上3002001000Response(pm)-8%-7%-6%-5%-4%-3Histamine,log%MHistamineHistamine鄄Histamine(8%μm)圖1組胺引起的DMＲ信號的量效關(guān)系曲線;組胺預(yù)處劑量與8μM組胺引起的DMＲ信號的量效關(guān)系曲線Fig.1TherelationshipofdoseandDMＲresponseofhista-mine;therelationshipofpretreatmentdoseofhista-mineandDMＲresponseof8μMhistamineVol.29史麗穎等:組胺H1受體拮抗劑高通量篩選模型的建立及應(yīng)用469

存在組胺受體，組胺與受體結(jié)合后引起DMＲ信號響應(yīng)，且再次加入組胺后，組胺的激動作用被脫敏。2．1．2組胺H1受體拮抗劑引起的DMＲ響應(yīng)信號阿司咪唑、氯雷他定為組胺H1受體拮抗劑，以不同濃度的阿司咪唑或氯雷他定處理A-431細(xì)胞后，再加入16μM組胺(EC80)，組胺引起的DMＲ響應(yīng)信號被抑制，且拮抗劑的濃度越高抑制越強(qiáng)，呈劑量依賴性，兩種拮抗劑的抑制活性阿司咪唑(IC50=0．01μM)強(qiáng)于氯雷他定(IC50=0．18μM)，見圖2。3002001000Response(pm)-12%-10Compound,log%MHistamineHistamine鄄Histamine(8%μm)-8%-6%-4圖2組胺H1受體拮抗劑預(yù)處劑量與16μM組胺引起的DMＲ信號的量效關(guān)系曲線Fig.2TherelationshipofpretreatmentdoseofH1Ｒantago-nistsandDMＲresponseof16μMhistamineA-431細(xì)胞天然高表達(dá)組胺H1-4受體中的H1受體［12］，因此上述結(jié)果提示采用無標(biāo)記細(xì)胞靶點(diǎn)藥理學(xué)技術(shù)可以成功監(jiān)測組胺激動A-431細(xì)胞上H1受體所引起的DMＲ響應(yīng)信號、組胺被組胺受體激動劑脫敏的DMＲ響應(yīng)信號和組胺被組胺受體拮抗劑所拮抗的DMＲ響應(yīng)信號。由此成功建立組胺H1受體拮抗劑篩選方法:首先監(jiān)測待篩選化合物預(yù)處理A-431細(xì)胞所引起的DMＲ響應(yīng)信號，如果待測化合物不引起DMＲ響應(yīng)信號，則繼續(xù)加入組胺監(jiān)測組胺所引起的DMＲ響應(yīng)信號被待測化合物拮抗的程度，判斷待測化合物對組胺H1受體的拮抗活性。2．2組胺H1受體拮抗劑高通量篩選模型的應(yīng)用2．2．1待測化合物的組胺H1受體拮抗活性篩選采用無標(biāo)記細(xì)胞靶點(diǎn)藥理學(xué)篩選技術(shù)對32個待測化合物的組胺H1受體拮抗活性進(jìn)行了篩眩首先，將10μL待測化合物(最高工作濃度64μM，2倍稀釋，2個濃度梯度)加入已接種A-431細(xì)胞的Epic湟384孔生物感應(yīng)?
【作者單位】： 大連大學(xué)藥物研究所;遼寧中醫(yī)藥大學(xué);中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81473436,31270398)
【分類號】：R96

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4 黃s鷖

本文編號：2527856