【摘要】：利用N-芴甲氧羰基-L-賴氨酸分子接枝異硫氰基熒光素,合成賴氨酸-熒光素小分子,在反相微乳液中京尼平作為交聯(lián)劑交聯(lián)賴氨酸-熒光素分子制備超小納米粒。所得納米粒純化后進行紫外-近紅外可見光掃描分析,確定熒光素交聯(lián)到納米粒上及未反應(yīng)小分子被完全洗脫。動態(tài)光散射考察所得納米粒徑為(198.33±0.03)nm、透射電子顯微鏡觀察到納米粒呈球形,平均粒徑為39.78nm。熒光光譜表征所得納米粒與熒光素?zé)晒夤庾V完全吻合。利用膠質(zhì)瘤U87細胞進行納米粒熒光成像,細胞被染色。利用CHO細胞考察納米粒的毒性,在一定濃度下(小于8mg/mL)納米粒對細胞無明顯毒副作用。
【圖文】：

圖１Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ分子的合成路線Ｆｉｇ１ＴｈｅｓｔｒａｔｅｇｙｆｏｒｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＬｙｓ－ＦＩＴＣ圖２Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ質(zhì)譜圖Ｆｉｇ２ＭａｓｓｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆＬｙｓ－ＦＩＴＣ２．３Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ納米粒的性質(zhì)表征紫外分光光度計進行２００～９００ｎｍ全波長掃描，Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ納米粒最大吸收波長為４９２ｎｍ，無移動，與單體ＦＩＴＣ相同。濾液無特殊吸收峰，說明ＦＩＴＣ被牢牢的共價接枝在納米粒內(nèi)，且納米粒溶液中無游離單體存在（圖４（ａ））。在４８８ｎｍ激發(fā)下，Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ納米粒與ＦＩＴＣ單體熒光發(fā)射譜相同，但是強度略有下降，，這是由于ＦＩＴＣ熒光不穩(wěn)定極易發(fā)生淬滅，納米粒制備過程中部分熒光淬滅造成的。表１Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ納米粒動態(tài)光散射粒徑Ｔａｂｌｅ１ＰａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｏｆＬｙｓ－ＦＩＴＣｎａｎｏｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｄｙｎａｍｉｃｌａｓｅｒｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ（ＤＬＳ）編號Ｓｉｚｅ／ｎｍＰＤＩ１１９８．２０．２６９２１９７．５０．２４６３１９９．３０．３２１ａｖｅｒａｇｅ１９８．３３±０．７４０．２８±０．０３圖３Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ透射電鏡（ＴＥＭ）形貌觀察粒徑分布Ｆｉｇ３ＴＥＭｉｍａｇｅ＆ｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＬｙｓ－ＦＩＴＣｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ（ｓｃａｌｅｂａｒ＝１００ｎｍ）２．４Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ納米粒細胞熒光成像成像前Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ單體溶液（１．０ｍｇ／ｍＬ，０．００１８ｍｍｏＬ／ｍＬ）在３６８ｎｍ激發(fā)下呈現(xiàn)較強藍綠色熒光（如圖５插圖所示），制備成Ｌｙ

Ｃ納米粒與ＦＩＴＣ單體熒光發(fā)射譜相同，但是強度略有下降，這是由于ＦＩＴＣ熒光不穩(wěn)定極易發(fā)生淬滅，納米粒制備過程中部分熒光淬滅造成的。表１Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ納米粒動態(tài)光散射粒徑Ｔａｂｌｅ１ＰａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｏｆＬｙｓ－ＦＩＴＣｎａｎｏｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｄｙｎａｍｉｃｌａｓｅｒｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ（ＤＬＳ）編號Ｓｉｚｅ／ｎｍＰＤＩ１１９８．２０．２６９２１９７．５０．２４６３１９９．３０．３２１ａｖｅｒａｇｅ１９８．３３±０．７４０．２８±０．０３圖３Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ透射電鏡（ＴＥＭ）形貌觀察粒徑分布Ｆｉｇ３ＴＥＭｉｍａｇｅ＆ｐａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＬｙｓ－ＦＩＴＣｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ（ｓｃａｌｅｂａｒ＝１００ｎｍ）２．４Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ納米粒細胞熒光成像成像前Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ單體溶液（１．０ｍｇ／ｍＬ，０．００１８ｍｍｏＬ／ｍＬ）在３６８ｎｍ激發(fā)下呈現(xiàn)較強藍綠色熒光（如圖５插圖所示），制備成Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ納米粒后，熒光強度略有下降（如圖４（ｂ）所示）。Ｌｙｓ－ＦＩＴＣ納米粒溶液（２．０ｍｇ／ｍＬ，估算ＦＩＴＣ濃度為０．００２ｍｍｏＬ／ｍＬ）與Ｕ８７細胞共培養(yǎng)后，在４８８ｎｍ激發(fā)下，呈黃綠色熒光，且與明場細胞對照，絕大多數(shù)細胞均有熒光，細胞輪廓明顯（圖５）。細胞熒光成像圖放大２倍后，可清晰看到細胞貼壁伸展，活性良好。納米粒子一般是通過粘附在細胞表面或者通過胞吞／胞飲的方式入胞而實現(xiàn)細胞熒光標記成像的［１７］，目前還沒有單獨以賴氨酸為骨架材料制備納米粒并用于細胞
【作者單位】： 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所生物技術(shù)部;中國科學(xué)院大學(xué);
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(31271055,31470944) 遼寧省自然科學(xué)基金資助項目(2013020177)
【分類號】：R943

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本文編號：2527164