【摘要】：兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)在人體的腎上腺髓質(zhì)和交感神經(jīng)終端生成，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一類重要的神經(jīng)遞質(zhì)，它們被廣泛地用于治療和診斷如嗜鉻細(xì)胞瘤、高血壓、心肌梗塞等相關(guān)疾病，與人類的健康密切相關(guān)。因此，檢測生物體中兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量具有重要的意義。但是，生物體中兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量比較低以及對溫度、光比較敏感，因此，兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)的檢測方法應(yīng)該具有一定的選擇性和靈敏度，同時(shí)應(yīng)該具備一個(gè)快速、簡便的樣品處理方法，這樣才能夠?qū)ζ溥M(jìn)行快速、準(zhǔn)確地定量。而現(xiàn)有的檢測方法大多數(shù)存在著以下缺點(diǎn)，如操作步驟繁瑣、靈敏度不夠以及檢測儀器昂貴、不易普及，因此開發(fā)研究出一個(gè)同時(shí)檢測生物體中兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)的快速靈敏、可靠地方法具有非常重要的意義。 左旋多巴與卡比多巴是目前治療帕金森病最有效的組合，但是長期使用會(huì)出現(xiàn)不同癥狀的并發(fā)癥，最常見的為“劑末效應(yīng)”和“開關(guān)效應(yīng)”，這些并發(fā)癥可能與左旋多巴在體內(nèi)濃度的波動(dòng)有關(guān)。目前臨床上為了控釋這種波動(dòng)癥狀，最常用的方法是讓患者服用左旋多巴-卡比多巴控釋片(息寧，規(guī)格200/50mg)，但是控釋片其釋藥特點(diǎn)往往會(huì)影響左旋多巴的吸收速度，，導(dǎo)致起效時(shí)間延長，經(jīng)常需要與速釋片聯(lián)用才能達(dá)到較好的治療效果。因此，目前開發(fā)了一種左旋多巴和卡比多巴的緩釋制劑(現(xiàn)處于Ⅲ期臨床實(shí)驗(yàn)階段)，希望能夠?qū)⒆笮喟偷臐舛瓤焖俜�(wěn)定在一定的水平上，從而降低或消除由于長期使用而導(dǎo)致的癥狀波動(dòng)等副作用。對于這種制劑在人體中療效的研究，建立一個(gè)同時(shí)檢測病人血漿中左旋多巴和卡比多巴的快速簡便的方法至關(guān)重要，而現(xiàn)有的方法存在的缺點(diǎn)有成本高，選擇性差，樣品制備過程復(fù)雜以及分析時(shí)間長。因此建立一個(gè)快速方便、靈敏度高、選擇性好的方法同時(shí)檢測人血漿中左旋多巴和卡比多巴，對于指導(dǎo)臨床上治療帕金森病的合理用藥以及開發(fā)新劑型具有重大的意義。 化學(xué)發(fā)光是近幾十年來快速發(fā)展起來的一種分析方法，其分析靈敏度高、儀器設(shè)備簡單，特別是近年來發(fā)展起來的金屬納米粒子參與的化學(xué)發(fā)光分析，更加提高了分析的靈敏度，成為檢測生物體中微量或痕量物質(zhì)的一種重要工具。本課題組前期開發(fā)了一種新的高效液相色譜(HPLC)-在線納米金催化魯米諾-過氧化氫化學(xué)發(fā)光檢測器，該檢測器靈敏度高、選擇性好以及線性范圍寬，利用該技術(shù)同時(shí)對8種酚類物質(zhì)進(jìn)行了測定，檢測限在0.53-0.97ng/mL之間，相當(dāng)于10.6-19.4pg(進(jìn)樣量為20μL)，并且成功地應(yīng)用到“Cabernet Sauvignon”干紅葡萄酒中的酚類物質(zhì)的檢測。本論文將這種高靈敏度以及高選擇性地聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用到了神經(jīng)遞質(zhì)以及腦部用藥的分析。以兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)以及左旋多巴和卡比多巴為研究對象，探討了這些物質(zhì)對在線納米金催化的魯米諾-過氧化氫體系化學(xué)發(fā)光的影響，并對其機(jī)制進(jìn)行了探討，同時(shí)，利用HPLC-在線納米金催化魯米諾-過氧化氫化學(xué)發(fā)光檢測器同時(shí)檢測大鼠腦組織中兒茶酚類神經(jīng)遞質(zhì)，以及藥物制劑卡左雙多巴控釋片和人血漿樣品中左旋多巴和卡比多巴的測定。具體研究工作如下： 第一部分高效液相色譜與在線納米金催化的魯米諾化學(xué)發(fā)光聯(lián)用法同時(shí)測定兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì) 本研究基于在線納米金催化魯米諾化學(xué)發(fā)光體系，建立了同時(shí)測定大鼠腦內(nèi)兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)的快速簡便的化學(xué)發(fā)光分析法。利用紫外可見吸收光譜和透射電鏡（TEM），證明了本化學(xué)發(fā)光體系的實(shí)質(zhì)是氯金酸、魯米諾的溶解介質(zhì)（碳酸鹽緩沖液）和過氧化氫在線生成的納米金催化魯米諾 過氧化氫體系，同時(shí)也得出了兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)能夠增加體系中納米金生成的量從而增強(qiáng)體系發(fā)光的結(jié)論。實(shí)驗(yàn)同時(shí)研究了液相色譜條件，化學(xué)發(fā)光體系中的各反應(yīng)物的濃度和多種兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)對化學(xué)發(fā)光體系的影響。結(jié)果顯示，液相色譜條件在甲醇：0.2%磷酸為5:95的條件下等度洗脫，8.5min內(nèi)能夠很好的將去甲腎上腺素，腎上腺素以及多巴胺分開。在最優(yōu)條件下，本方法測得的去甲腎上腺素，腎上腺素以及多巴胺的檢測限在1.32-1.90ng/mL之間（S/N=3），相當(dāng)于26.4-38.0pg (進(jìn)樣量為20μL)。利用本法成功地測定了大鼠腦勻漿樣品中兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量，回收率在94.6%-106.5%之間以及精密度在1.3%-5.5%之間。 第二部分高效液相色譜與在線納米金催化的魯米諾化學(xué)發(fā)光聯(lián)用法同時(shí)測定左旋多巴和卡比多巴 左旋多巴和卡比多巴組合是治療帕金森病的首選藥物，但是隨著長時(shí)間的用藥，患者會(huì)出現(xiàn)不同癥狀的并發(fā)癥，最常見的癥狀為“劑末效應(yīng)”和“開關(guān)效應(yīng)”�？赡苁怯勺笮喟脱帩舛瓤焖俨▌�(dòng)導(dǎo)致的，目前臨床上為了控釋這種波動(dòng)癥狀，最常用的方法是讓患者服用左旋多巴-卡比多巴控釋片，但是控釋片其釋藥特點(diǎn)往往會(huì)影響左旋多巴的吸收速度，導(dǎo)致起效時(shí)間延長，經(jīng)常需要與速釋片聯(lián)用才能達(dá)到較好的治療效果。近年來，正處于三期臨床試驗(yàn)階段的左旋多巴-卡比多巴緩釋片因能在較長時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定左旋多巴的血藥濃度，從而很好地控制帕金森患者癥狀的波動(dòng)。因此，建立一個(gè)快速簡便、靈敏度高的方法同時(shí)檢測血漿樣品中左旋多巴和卡比多巴的方法，對于指導(dǎo)帕金森患者的合理用藥以及開發(fā)新劑型具有重要的意義。本研究基于在線納米金催化魯米諾化學(xué)發(fā)光體系，建立了同時(shí)測定“息寧”藥片以及人血漿中左旋多巴和卡比多巴的快速簡便的化學(xué)發(fā)光分析法。該聯(lián)用法采用0.2%磷酸(A相)：甲醇(B相)=5:95的流動(dòng)相等度洗脫，能夠在10.5min內(nèi)將二者完全洗脫出來。實(shí)驗(yàn)同時(shí)對化學(xué)發(fā)光體系中的各反應(yīng)物的濃度、流速以及電壓分別進(jìn)行了優(yōu)化。在最優(yōu)條件下，本方法測得的左旋多巴和卡比多巴的檢測限分別為0.896、1.080ng/mL (S/N=3)，相當(dāng)于17.92、21.60pg (進(jìn)樣量為20μL)，線性范圍分別為2.24-448ng/mL (r=0.9960)、4.32-1080ng/mL (r=0.9964)。利用本法對“息寧”藥片和人血漿樣品中左旋多巴和卡比多巴含量進(jìn)行測定。結(jié)果藥片中左旋多巴和卡比多巴的平均回收率分別為100.5%和103.1%，RSD分別為2.4和4.0。人血漿中左旋多巴和卡比多巴的回收率在97.0%-103.5%之間以及精密度在0.5%-3.3%之間。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：O657.72;R927.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 吳亮;沐春磊;張群林;呂忱;張曉悅;;納米粒子參與的魯米諾化學(xué)發(fā)光及其分析應(yīng)用[J];化學(xué)進(jìn)展;2013年07期

2 陳翔;凌家俊;陳亮;;煙堿微透析回收率的體外測定方法及影響因素研究[J];廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2010年02期

3 王長連;韓文迪;黃品芳;劉亦偉;林瑋瑋;;左旋多巴在大鼠外周血及紋狀體細(xì)胞外液中的藥動(dòng)學(xué)研究[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;2011年24期

4 王新德;左旋多巴治療帕金森病的回顧和展望[J];中華老年醫(yī)學(xué)雜志;2004年02期

5 劉明杰,朱業(yè)湘;兒茶酚胺類神經(jīng)遞質(zhì)檢測技術(shù)及其研究進(jìn)展[J];中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2002年04期

6 王璐璐;葛衛(wèi)紅;方蕓;;反相高效液相色譜熒光檢測法測定尿液兒茶酚胺的濃度[J];中國藥師;2009年09期

7 方蘭云;姚潯平;姚珊珊;;固相萃取-HPLC-熒光檢測法測定血漿中的兒茶酚胺及其代謝產(chǎn)物[J];中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2010年08期

8 關(guān)磊;張祖康;王瑩;盛化飛;范文婷;高威;;新型氧化鐵納米材料的研究進(jìn)展[J];真空;2013年05期

9 孔粉英;王偉;;納米材料在電化學(xué)免疫傳感器中的應(yīng)用研究[J];鹽城工學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年02期

10 王志虎;;淺述帕金森病的臨床治療方法[J];中國傷殘醫(yī)學(xué);2013年10期

本文編號：2526138