【摘要】：惡性腫瘤是危害人類健康和生命的主要疾病之一,治療以手術(shù)和放化療為主,目前用于癌癥化療的金屬抗腫瘤藥物是以順鉑為主的重金屬、貴金屬配合物,但療效仍不盡人意,故尋找新的低毒高效藥物迫在眉睫,意義重大。鋅元素在哺乳動物細(xì)胞內(nèi)含量豐富,由它組成的配合物對細(xì)胞的毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于其他過渡金屬配合物,因此,篩選低毒高效的Zn(II)配合物并研究其抗癌機(jī)制具有重要意義。本文以五種常見腫瘤細(xì)胞株(子宮頸癌Hela、乳腺癌MCF-7、肺癌NCI-H446、A549、肝癌HepG2)為對象,運(yùn)用MTT法研究了三種含吡啶四氮環(huán)鋅配合物(L-Zn)的細(xì)胞毒活性,并運(yùn)用RT-PCR、Western-Bolt和免疫熒光染色法初步探討了毒活性較好的L2-Zn誘導(dǎo)Hela的凋亡機(jī)制,進(jìn)一步闡明了誘導(dǎo)凋亡因子AIF在其中的作用。論文主要分為以下兩個方面：(1)含吡啶四氮環(huán)鋅配合物的細(xì)胞毒活性研究三種L-Zn配合物在體外對5種常見腫瘤細(xì)胞株均有較強(qiáng)的抑制作用。配合物作用48 h后,5種細(xì)胞株增殖的IC50值均小于50μM, IC50值最小為3.73μM。三種L-Zn配合物對這五種腫瘤細(xì)胞株增殖的抑制作用均隨劑量的增加而增強(qiáng),劑量與效應(yīng)有很好的線性關(guān)系,并隨時間的推移對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用逐漸增強(qiáng)。其中配合物L(fēng)2-Zn對Hela腫瘤細(xì)胞有最強(qiáng)的細(xì)胞毒活性,ICso值低于陽性藥順鉑的IC50值,具有進(jìn)一步研究的價值。(2)L2-Zn抗腫瘤細(xì)胞通路研究選取毒活性較好的配合物L(fēng)2-Zn,研究其誘導(dǎo)Hela腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制。RT-PCR結(jié)果顯示：在配合物L(fēng)2-Zn誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡過程中,Caspase活性抑制因子IN mRNA水平隨著配合物的加入而增加,有著較好的濃度依賴性。AIF mRNA的水平略有增加,與對照組無顯著差異。WB結(jié)果顯示：在配合物L(fēng)2-Zn誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡過程中,沒有檢測到Caspase 3,6,7的活化形式,并且Procaspase 3,6,7的表達(dá)量沒有下降,說明Caspase 3,6,7未介導(dǎo)細(xì)胞凋亡過程,即非Caspase機(jī)制。將細(xì)胞核質(zhì)分離,分別檢測全細(xì)胞、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)中AIF蛋白表達(dá)水平,結(jié)果顯示隨著配合物L(fēng)2-Zn的加入,全細(xì)胞中AIF的表達(dá)量增加不明顯,這與核酸水平的變化相吻合；但細(xì)胞核內(nèi)AIF明顯增多,細(xì)胞質(zhì)中AIF是減少的,說明在細(xì)胞凋亡中,AIF從細(xì)胞漿移位至細(xì)胞核中,從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。免疫熒光染色結(jié)果再次證實配合物L(fēng)2-Zn促進(jìn)AIF從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中,從而發(fā)揮誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。配合物L(fēng)2-Zn對Hela腫瘤細(xì)胞的作用模式與順鉑不同,為解決目前經(jīng)典鉑類藥物耐藥性問題開辟了新的思路。
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：O641.4;R96

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本文編號：2522411