【摘要】：目的觀察二甲雙胍對血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導(dǎo)的成年大鼠心臟成纖維細胞(CF)增殖的影響,并探討其可能機制。方法通過胰酶、膠原酶Ⅱ聯(lián)合消化法獲取成年大鼠CF,AngⅡ(100nmol/L)刺激CF建立細胞增殖模型,并給予不同濃度(10、50及200μmol/L)二甲雙胍進行干預(yù)。采用噻唑藍法觀察CF的增殖情況,EdU摻入法測定CF的DNA合成能力。免疫印跡法檢測內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷酸化內(nèi)皮型一氧化氮合酶(peNOS)蛋白表達情況,硝酸還原酶法測定CF培養(yǎng)上清一氧化氮(NO)含量。結(jié)果AngⅡ刺激48h能夠明顯促進成年大鼠CF增殖(P0.05),二甲雙胍呈濃度依賴性抑制AngⅡ誘導(dǎo)的CF增殖,二甲雙胍呈濃度依賴性增加CF內(nèi)eNOS磷酸化水平和NO含量(P0.05),eNOS抑制劑N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)能阻斷二甲雙胍抑制AngⅡ誘導(dǎo)的CF增殖的作用(P0.05)。結(jié)論二甲雙胍能抑制AngⅡ誘導(dǎo)的成年大鼠CF增殖,與二甲雙胍激活CF內(nèi)eNOS/NO通路有關(guān)。
【圖文】：

3次。1.8統(tǒng)計學(xué)方法所有計量數(shù)據(jù)以x±s表示，兩組間的均值比較采用成組比較的t檢驗，多組間的均值比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1成年大鼠CF的鑒定倒置顯微鏡下，原代成年大鼠CF呈梭形或多角形，胞質(zhì)淡而幾乎透明，顯得很薄，折光性弱;細胞核較大，呈橢圓形，，無自發(fā)性搏動。取培養(yǎng)的第1代細胞進行波形蛋白免疫熒光染色，激光共聚焦熒光顯微鏡下可見CF胞漿呈綠色熒光(波形蛋白陽性)，超過95%的細胞為波形蛋白染色陽性，提示培養(yǎng)獲得的CF純度較高(圖1)。2.2二甲雙胍對AngⅡ誘導(dǎo)的CF增殖的影響AngⅡ(100nmol/L)刺激細胞48h后CF增殖明顯增加(P＜0．05)，而二甲雙胍(10、50、200μmol/L)可以呈濃度依賴性抑制AngⅡ誘導(dǎo)的CF增殖(P＜0．05)。AngⅡ(100nmol/L)刺激細胞48h顯著增加CF的DNA合成能力(P＜0．05)，而二甲雙胍(10、50、200μmol/L)呈濃度依賴性抑制AngⅡ誘導(dǎo)的CF的DNA合成(P＜0．05;圖2)。圖1．波形蛋白免疫熒光染色鑒定成年大鼠CF(比例尺=50μm)Figure1．ImmunofluorescencestainingofadultratCFwithvimentin圖2．二甲雙胍抑制AngⅡ誘導(dǎo)的成年大鼠CF增殖(比例尺=100μm)a為P＜0．05，與正常對照組比較;b為P＜0.05，與AngⅡ?qū)φ战M比較。Figure2．MetformininhibitsAngⅡ-inducedadultratCFproliferationCN43-1262/R中國動脈硬化雜志2015年第23卷第7期665

行波形蛋白免疫熒光染色，激光共聚焦熒光顯微鏡下可見CF胞漿呈綠色熒光(波形蛋白陽性)，超過95%的細胞為波形蛋白染色陽性，提示培養(yǎng)獲得的CF純度較高(圖1)。2.2二甲雙胍對AngⅡ誘導(dǎo)的CF增殖的影響AngⅡ(100nmol/L)刺激細胞48h后CF增殖明顯增加(P＜0．05)，而二甲雙胍(10、50、200μmol/L)可以呈濃度依賴性抑制AngⅡ誘導(dǎo)的CF增殖(P＜0．05)。AngⅡ(100nmol/L)刺激細胞48h顯著增加CF的DNA合成能力(P＜0．05)，而二甲雙胍(10、50、200μmol/L)呈濃度依賴性抑制AngⅡ誘導(dǎo)的CF的DNA合成(P＜0．05;圖2)。圖1．波形蛋白免疫熒光染色鑒定成年大鼠CF(比例尺=50μm)Figure1．ImmunofluorescencestainingofadultratCFwithvimentin圖2．二甲雙胍抑制AngⅡ誘導(dǎo)的成年大鼠CF增殖(比例尺=100μm)a為P＜0．05，與正常對照組比較;b為P＜0.05，與AngⅡ?qū)φ战M比較。Figure2．MetformininhibitsAngⅡ-inducedadultratCFproliferationCN43-1262/R中國動脈硬化雜志2015年第23卷第7期665
【作者單位】： 南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院心內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(81000055;81070195)
【分類號】：R965

【共引文獻】

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本文編號：2517202