【摘要】：氨氯地平為第三代二氫吡啶類Ca~(2+)通道阻滯藥,主要通過阻斷“L-型電位動作”鈣通道。阻滯血管平滑肌細胞外的Ca~(2+)進入細胞內(nèi),松弛平滑肌,降低心肌收縮力、降低頻率和減慢傳導(dǎo);此外,氨氯地平可通過提高細胞膜鈣泵活性,從而降低腦漿游離鈣濃度來降低血壓。氨氯地平口服吸收完全,較其他的鈣離子拮抗劑高,但其過程緩慢,在口服后的6~12h才呈現(xiàn)血藥濃度峰值,故氨氯地平具有降壓持續(xù)時間久、血壓峰谷波動較小等特點,可以使氨氯地平具有延遲高血壓發(fā)生并減輕高血壓發(fā)作程度的優(yōu)點。銀杏葉具有藥用價值,可以有效的預(yù)防和治療高血壓、冠心病、心絞痛等心腦血管疾病,廣泛應(yīng)用于臨床。臨床上常見與其他心腦血管藥物聯(lián)合使用,有報道稱,銀杏葉滴丸聯(lián)合苯磺酸氨氯地平可以顯著降低老年高血壓患者血漿s DR4、s DR5的水平,改善老年高血壓患者心肌細胞凋亡。但是從藥代層面評估銀杏葉對氨氯地平的影響尚未見報道。銀杏葉片是否對其藥動學(xué)有影響,值得關(guān)注。隨著社會發(fā)展,飲酒成為人類的一種生活習慣,白酒、啤酒、紅酒、香檳等不僅影響了人們的生活,更影響了健康。飲酒時乙醇首先經(jīng)胃吸收入血,其在胃平滑肌中的濃度高于血中的濃度,故對胃腸道的影響更為常見。有研究指出乙醇可直接損害胃粘膜、對消化道平滑肌具有毒性作用等不良反應(yīng)。本課題組建立了大鼠離體胃底、胃體、胃竇、賁門和幽門環(huán)行肌的藥理學(xué)實驗方法,并探索了毒蕈堿(M)受體及5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)受體介導(dǎo)胃平滑肌收縮的藥理學(xué)特征。但是,乙醇對大鼠離體胃底、胃體、賁門和幽門環(huán)行肌的作用尚不清楚。第一部分中藥銀杏葉片對苯磺酸氨氯地平在大鼠體內(nèi)藥動學(xué)的影響目的:建立檢測苯磺酸氨氯地平代謝產(chǎn)物的HPLC-Orbitrap-Fusion方法,建立測定苯磺酸氨氯地平及其代謝產(chǎn)物的UPLC-MS/MS同時測定方法,通過比較單獨灌胃給予苯磺酸氨氯地平與合用中藥復(fù)方制劑銀杏葉片后大鼠體內(nèi)苯磺酸氨氯地平藥動學(xué)參數(shù)的變化,以及苯磺酸氨氯地平代謝產(chǎn)物的變化,探討銀杏葉片對苯磺酸氨氯地平藥動學(xué)是否有影響。方法:色譜條件:色譜柱:Xbridge C18色譜柱(100 mm×3 mm,3.5μm);流動相A:0.1%甲酸水溶液,流動相B:乙腈,梯度洗脫;進樣量為2μL;流速:0.6 m L/min;柱溫箱:30°C;樣品室溫度:4°C;梯度洗脫條件如下:0 min,30%B;3.5 min,50%B;8.5 min,80%B;10 min,90%B;10.5 min,90%B;11 min,30%B;內(nèi)標:哌唑嗪;質(zhì)譜條件:UPLC-MS/MS:離子化方式:電噴霧離子化源(electrospray ionization,ESI);檢測方式:正離子檢測;掃描方式:多反應(yīng)檢測(multiple reaction monitoring,MRM);毛細管電壓3 k V;去溶劑氣流速為1000 L/h,源溫度:150°C,去溶劑溫度500°C;并選擇合適的被測物及內(nèi)標物的檢測離子對、駐留時間、掃描時間、錐孔電壓和碰撞電壓等參數(shù)。HPLC-Orbitrap-Fusion:正、負離子模式全掃描分析條件,正離子噴霧電壓:3.5 k V,負離子噴霧電壓:2.5 k V;鞘氣流速:40 Arb,輔助氣流速:12 Arb,尾氣流速1 Arb;離子傳輸管溫度:330°C,噴霧器溫度:315°C,掃描范圍:100-600 m/z,質(zhì)量分辨率:60000。實驗方法:1采用HPLC-Orbitrap-Fusion和Mass Frontier 7.0軟件分析代謝物的種類及結(jié)構(gòu)。2采用UPLC-MS/MS分析銀杏葉片對大鼠血漿中苯磺酸氨氯地平藥代動力學(xué)的影響。將20只大鼠隨機分為2組,每組10只,對照組灌胃給予2 m L蒸餾水,實驗組灌胃給予銀杏葉片溶液2 m L,每日一次,連續(xù)給藥15天,第16天,每只大鼠灌胃給予苯磺酸氨氯地平2 m L(相當于氨氯地平1 mg/Kg),給藥前12 h禁食,自由飲水,分別于給藥前0.5 h和0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24 h眼底靜脈叢取血0.5 m L于肝素抗凝管內(nèi),離心分離血漿,-20°C保存,備用。藥動學(xué)參數(shù)處理:測定每只大鼠各取血點的氨氯地平血藥濃度及代謝物的峰面積,采用藥動學(xué)軟件Win Nonlin對其進行處理得到相關(guān)藥動學(xué)參數(shù)。實驗數(shù)據(jù)均以Mean±SD表示。通過統(tǒng)計學(xué)軟件Graph Pad Prism 5.0、Graphpad Instart 3.0依次將實驗組大鼠與對照組大鼠間主要藥動學(xué)參數(shù)進行雙因素方差統(tǒng)計學(xué)分析。P值小于0.05則認為兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:苯磺酸氨氯地平、哌唑嗪的保留時間分別為3.38 min和1.12min。血漿內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾苯磺酸氨氯地平和內(nèi)標物質(zhì)出峰及測定。苯磺酸氨氯地平的回歸曲線為Y=0.7887C+0.3851(R2=0.9996),線性范圍為0.15-60 ng/m L,定量下限為0.15 ng/m L。低(0.3 ng/m L)、中(5 ng/m L)、高(30 ng/m L)濃度質(zhì)控樣品溶液的日內(nèi)和日間精密度RSD均低于15%,平均回收率分別為67.67%、70.00%和80.16%,平均基質(zhì)效應(yīng)RSD分別為109%、100%、100%,放置在室溫4 h、24 h與-20°C冷凍儲存30天,血漿樣品均穩(wěn)定。未合用中藥組大鼠苯磺酸氨氯地平的主要藥動學(xué)參數(shù)分別為AUC_(0-t):64.40±25.54 ng/m L·h;AUC_(0-∞):74.58±29.81 ng/m L·h;t_(1/2):6.91±1.64 h;T_(max):1.37±0.44 h;Cl:0.02±0.006 L/h/kg;MRT:10.17±0.60;C_(max):5.73±3.16ng/m L。合用銀杏葉片后,苯磺酸氨氯地平的主要藥動學(xué)參數(shù)分別為AUC_(0-t):33.49±10.70 ng/m L·h;AUC_(0-∞):36.72±11.06 ng/m L·h;t_(1/2):6.70±1.07h;T_(max):2.50±1.30 h;Cl:0.03±0.008 L/h/kg;MRT:10.26±1.43;C_(max):3.29±1.34 ng/m L。將未合用中藥組與合用銀杏葉組大鼠苯磺酸氨氯地平的主要動力學(xué)參數(shù)進行統(tǒng)計分析,結(jié)果顯示,與未合用中藥組相比,AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)和C_(max)明顯減少,T_(max)和Cl明顯的增加,且具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。通過HPLC-Orbitrap-Fusion分析以及Mass Frontier 7.0軟件對其結(jié)構(gòu)的解析,共確定27種代謝物。在銀杏葉對苯磺酸氨氯地平藥動學(xué)影響實驗中,未合用中藥組大鼠血漿樣本中共檢測出9種代謝產(chǎn)物,分別為M2、M3、M5、M7、M14、M15、M16、M18、M23。在合用銀杏葉片組大鼠血漿樣本中共檢測出11種代謝產(chǎn)物,分別為M2、M3、M5、M7、M9、M14、M16、M17、M18、M24、M22。其中代謝物M15和M23只存在于未合用中藥組;同樣,代謝物M9、M17、M22、M24只存在于合用銀杏葉片組。結(jié)論:本文所建立的UPLC-MS/MS測定苯磺酸氨氯地平及其代謝物的方法準確,靈敏度高、重現(xiàn)性好,適用于大鼠體內(nèi)血漿中苯磺酸氨氯地平濃度的測定;本文所建立的HPLC-Orbitrap-Fusion方法分辨率高、分析速度快,共檢測出27種代謝產(chǎn)物。適用于大鼠體內(nèi)血漿中苯磺酸氨氯地平代謝物種類的檢測。并且證明,苯磺酸氨氯地平合用銀杏葉片時,后者顯著抑制大鼠體內(nèi)苯磺酸氨氯地平的吸收,加快其清除,且代謝物種類發(fā)生了改變。第二部分乙醇對大鼠胃不同區(qū)域環(huán)行肌M受體和5-HT受體介導(dǎo)收縮反應(yīng)的選擇性抑制作用目的:利用大鼠胃不同區(qū)域環(huán)行肌標本,研究乙醇對M受體和5-HT受體介導(dǎo)的收縮反應(yīng)是否具有選擇性抑制作用。方法:制備大鼠離體胃底、胃體、賁門和幽門環(huán)行肌標本,觀察卡巴膽堿(carbachol,CCh)或5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)誘發(fā)的收縮反應(yīng)及乙醇的作用。結(jié)果:0.05‰~0.5‰乙醇不影響CCh誘發(fā)的胃底和賁門環(huán)行肌收縮反應(yīng)以及5-HT誘發(fā)的胃底和胃體環(huán)行肌收縮反應(yīng)(P0.05)。但是0.1‰和0.5‰乙醇顯著抑制了CCh誘發(fā)的胃體環(huán)行肌收縮,Emax值(g)由對照組的12.18±0.33降至10.88±0.41,-Log EC50值由對照組的6.33±0.05降至6.12±0.06(P(27)0.05)。同濃度乙醇顯著抑制了CCh誘發(fā)的幽門環(huán)行肌收縮,Emax值(g)由對照組的2.87±0.15降至2.2±0.13,-Log EC50值由對照組的6.49±0.10降至6.05±0.09(P(27)0.01)。乙醇預(yù)處理賁門環(huán)行肌前,5-HT誘發(fā)賁門環(huán)行肌收縮的Emax值(g)是2.93±0.35,-Log EC50值是6.17±0.21;0.1‰和0.5‰濃度的乙醇顯著抑制了5-HT誘發(fā)的賁門環(huán)行肌收(P(27)0.05),其Emax值(g)降至2.1±0.30(P(27)0.05),-Log EC50值未發(fā)生顯著改變。結(jié)論:乙醇對大鼠胃不同區(qū)域環(huán)行肌收縮功能的抑制強度是:賁門(5-HT)幽門(CCh)胃體(CCh)。在受體激動劑誘發(fā)環(huán)行肌收縮反應(yīng)的抑制特點方面,乙醇對CCh的活性及其與受體的親和力均有抑制作用,但是乙醇僅抑制5-HT的活性。
文內(nèi)圖片：
圖片說明： C-1 氨氯地平和哌唑嗪的液相色譜圖：A 大鼠空白血漿樣品；B 大白血漿加樣（上：苯磺酸氨氯地平，，下：哌唑嗪）；C 大鼠血漿.2-1 Chromatograms ofAML and prazosin: (A) blank plasma; (B)Aand prazosin spiked in blank plasma (up:AML, down: prazosin)AML and prazosin in plasma+MS2 (409.00): 1.370 to 1.638 min from Sample 1 (TuneSampleID) of anlvdipingerji2.wiff (Turbo Spray), Cent... Max. 1.1e7 cps.4.50e65.00e65.50e66.00e66.50e67.00e67.50e68.00e68.50e69.00e69.50e61.00e71.05e71.10e71.13e7Intensity,cps238.2294.2
文內(nèi)圖片：
圖片說明： 圖 3 大鼠血漿氨氯地平標準曲線 Y = 0.7887C + 0.3851 R2 = 0.9996(weighting:1/x^2)Fig.3 Standard curve ofAMLin plasma of rats, calibration forAMLY =0.7887C + 0.3851 R2 = 0.9996 (weighting:1/x^2)
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R965

【參考文獻】

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本文編號：2513647