【摘要】：引言:腫瘤是嚴(yán)重威脅人類(lèi)生命健康的疾病,目前治療腫瘤的首選方法是手術(shù),其次是化療、放療、激素治療、生物治療等,常用的化療藥物主要以細(xì)胞毒性藥物為主,存在靶向性差、毒副作用大、治療效果不理想的問(wèn)題。近年研究表明超聲聯(lián)合載藥微泡可有效殺傷腫瘤細(xì)胞,但是微泡粒徑較大,其靶向遞送效果有限。全氟戊烷(perfluoropentane,PFP)納米液滴是超聲造影劑的一種,其粒徑小于1μm,可穿過(guò)腫瘤新生微血管內(nèi)皮細(xì)胞間隙,在超聲輻照或加熱條件下可氣化成微泡,但目前常見(jiàn)的用于制備PFP納米液滴的包裹材料需有機(jī)溶劑溶解,因此殘留的有機(jī)溶劑易在機(jī)體內(nèi)蓄積引起毒副作用。而正己酰羧甲基殼聚糖(carboxymethyl-hexanoyl chitosan,CHC)是一種天然的高分子材料易溶于水且安全無(wú)毒,生物相容性良好。本研究的目的是:通過(guò)合成CHC,以阿霉素(Doxorubicin,DOX)為模型藥物,制備CHC-PFP-DOX納米液滴,研究其體外超聲成像效果和超聲作用下的抗腫瘤作用,為臨床治療腫瘤提供方法依據(jù)。本研究包含以下三部分:1、CHC-PFP-DOX納米液滴的制備及表征2、CHC-PFP-DOX納米液滴的體外超聲成像研究3、超聲聯(lián)合CHC-PFP-DOX納米液滴抗腫瘤作用的體外研究。第一部分CHC-DOX-PFP納米液滴的制備及表征目的:合成CHC,用其制備CHC-PFP-DOX納米液滴,對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。方法:利用羧甲基殼聚糖與正己酸酐合成CHC,通過(guò)紅外光譜儀和核磁共振波譜儀分析鑒定合成物。采用聲振乳化法制備藥物載體質(zhì)量比分別為1:5、1:10、1:20的CHC-PFP-DOX納米液滴,通過(guò)激光粒度儀檢測(cè)粒徑、電位,用透射電鏡(Transmission electron microscope,TEM)觀察其表面形態(tài),用紫外分光光度法計(jì)算CHC-PFP-DOX納米液滴載藥量和包封率,利用高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)法測(cè)定DOX濃度,計(jì)算CHC-PFP-DOX納米液滴在超聲和非超聲作用下的藥物累積釋放率。結(jié)果:成功合成CHC,用其制備出CHC-PFP-DOX納米液滴,以藥物載體質(zhì)量比為1:5、1:10、1:20制備的CHC-PFP-DOX納米液滴的粒徑分別為(458±43)nm、(286±55)nm和(216±21)nm、包封率為(52.06±10.14)%、(38.67±13.43)%和(9.50±5.50)%,載藥量分別為(8.68±1.70)%、(3.21±0.70)%和(0.45±0.26)%。在超聲作用下,CHC-PFP-DOX納米液滴(藥物載體質(zhì)量比為1:5)的藥物累積釋放率比無(wú)超聲作用下的高((70.28±3.32)%vs(36.07±1.68)%)。結(jié)論:利用羧甲基殼聚糖與正己酸酐可合成CHC;成功制備粒徑分布均勻且圓整的CHC-PFP-DOX納米液滴,以1:5的藥物載體質(zhì)量比可制備具有一定包封率和載藥量的CHC-PFP-DOX納米液滴;超聲可促進(jìn)CHC-PFP-DOX納米液滴的藥物釋放。第二部分CHC-DOX-PFP納米液滴的體外超聲成像研究目的:探討CHC-PFP-DOX納米液滴超聲成像條件,為其應(yīng)用于超聲成像奠定基礎(chǔ)。方法:構(gòu)建成像模型并使用Philips iU-22型超聲診斷儀對(duì)CHC-PFP-DOX納米液滴進(jìn)行體外超聲成像。設(shè)定不同的成像溫度(25℃、37℃、45℃),摸索促發(fā)CHC-PFP-DOX納米液滴氣液相變的溫度;設(shè)定不同的機(jī)械指數(shù)(Mechanism index,MI),分別以MI=0.4、0.5、0.6的超聲參數(shù)對(duì)CHC-PFP-DOX納米液滴(濃度:2mg/ml、5mg/ml)進(jìn)行超聲成像,利用Image J軟件測(cè)定各組超聲成像的灰度值,以定量評(píng)價(jià)各組成像效果。結(jié)果:在25℃條件下,納米液滴沒(méi)有成像效果,而在45℃和37℃條件下,納米液滴可成像,其標(biāo)準(zhǔn)化灰度值分別為7.52±1.71和12.42±1.51,兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);濃度為5mg/ml的納米液滴標(biāo)準(zhǔn)化灰度值顯著大于濃度為2mg/ml的納米液滴的標(biāo)準(zhǔn)化灰度值(P0.05);濃度為5mg/ml納米液滴在各MI條件下成像具有差異,MI=0.5時(shí),其標(biāo)準(zhǔn)化灰度值顯著高于MI=0.4的標(biāo)準(zhǔn)化灰度值(P0.05),而M=0.5與MI=0.6之間的標(biāo)準(zhǔn)化灰度值沒(méi)有顯著性差異(P0.05)。納米液滴在溫度為37℃、MI=0.5、濃度為5mg/ml條件下超聲成像,其標(biāo)準(zhǔn)化灰度值顯著高于聲諾維的標(biāo)準(zhǔn)化灰度值((11.54±1.41)vs(8.65±0.95),P0.05)。結(jié)論:納米液滴在溫度為37℃、MI=0.5、濃度為5mg/ml條件下,可獲得良好的超聲成像效果且效果優(yōu)于聲諾維。第三部分超聲聯(lián)合CHC-PFP-DOX納米液滴抗腫瘤的體外研究目的:探討CHC對(duì)正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的毒性作用,研究超聲聯(lián)合CHC-PFP-DOX納米液滴的抗腫瘤作用。方法:在三種濃度(1mg/ml、5 mg/ml、10 mg/ml)的CHC條件下培養(yǎng),觀察人血管平滑肌細(xì)胞和A2780細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。摸索最佳的超聲參數(shù)組合,設(shè)置不同的藥物濃度梯度以確定DOX的劑量。研究超聲聯(lián)合CHC-PFP-DOX納米液滴抗卵巢癌細(xì)胞的作用,實(shí)驗(yàn)分組:空白組、US組、CHC-PFP組、CHC-PFP-DOX組、DOX組、US+CHC-PFP組、US+DOX組、US+CHC-PFP-DOX組,利用CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞存活率。結(jié)果:在1mg/ml、5 mg/ml、10 mg/ml的CHC濃度條件下,人血管平滑肌細(xì)胞的存活率分別為(98.95±6.36)%,(98.11±6.49)%,(96.63±3.69)%,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);A2780細(xì)胞的存活率分別為(99.55±8.9)%,(96.32±6.9)%和(93.91±2.81)%,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。US組、CHC-PFP組、CHC-PFP-DOX組、DOX組、US+CHC-PFP組、US+DOX組、US+CHC-PFP-DOX組,細(xì)胞存活率分別為(92.50±7.21)%,(92.90±2.16)%,(85.69±13.22)%,(49.56±4.64)%,(85.24±2.73)%,(45.62±8.46)%,(34.60±4.11)%。US+CHC-PFP-DOX組與DOX組,US+CHC-PFP-DOX組與US+DOX組之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:CHC對(duì)正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞毒性低,超聲聯(lián)合CHC-PFP-DOX納米液滴可提高藥物對(duì)腫瘤的殺傷作用,為其應(yīng)用于腫瘤治療奠定基礎(chǔ)。
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【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R943;R96

【參考文獻(xiàn)】

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2 張穎;楊紅;;卵巢癌分子靶向治療的研究進(jìn)展[J];中國(guó)婦產(chǎn)科臨床雜志;2012年05期

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本文編號(hào)：2492495