【摘要】：目的:在體外研究細胞毒性化療藥物表柔比星對乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)復制水平的影響。方法:3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法檢測0、0.1、0.5、1.0μmol/L不同濃度表柔比星對HBV穩(wěn)定細胞系Hep G2.2.15細胞和Hep G2-HBV1.1細胞活力的影響。將藥物直接添加在Hep G2.2.15細胞和Hep G2-HBV1.1細胞中,提取細胞內(nèi)及上清中的HBV復制中間體,通過real-time PCR法和southern-blot法檢測HBV DNA拷貝量。結果:Hep G2.2.15細胞分別經(jīng)0、0.1、0.2、0.5μmol/L表柔比星處理后,細胞內(nèi)HBV病毒拷貝量(×106)分別是3.53±0.26、5.39±0.23、9.40±0.92、19.07±1.47,各組間有統(tǒng)計學差異(F=10.984,P=0.005)。同樣,Hep G2-HBV1.1細胞也分別經(jīng)0、0.1、0.2、0.5μmol/L表柔比星處理后,細胞內(nèi)HBV病毒拷貝量(×106)分別是2.80±0.37、5.14±0.49、14.24±1.29、26.59±1.98,各組間有統(tǒng)計學差異(F=13.122,P=0.003)。Southern-blot檢測表明Hep G2.2.15細胞內(nèi)HBV DNA復制中間體相對量在對照組(0μmol/L表柔比星)和處理組(0.5μmol/L表柔比星)中分別為(1.00±0.01)和(1.53±0.05),對照組和藥物處理組比較有統(tǒng)計學差異(t=19.202,P=0.002)。同樣,Hep G2-HBV1.1細胞內(nèi)HBV DNA復制中間體相對量,在對照組和處理組中分別為1.01±0.02、3.12±0.20,對照組和藥物處理組比較有統(tǒng)計學差異(t=18.034,P=0.003)。上述結果提示表柔比星促進細胞內(nèi)HBV的復制。Hep G2.2.15細胞分別經(jīng)0、0.1、0.2、0.5μmol/L表柔比星處理后,細胞上清液中HBV病毒拷貝量(×106)分別是2.37±0.22、3.50±0.27、6.02±0.56、17.74±0.96,各組間有統(tǒng)計學差異(F=20.726,P=0.001)。同樣,Hep G2-HBV1.1細胞也分別經(jīng)0、0.1、0.2、0.5μmol/L表柔比星處理后,細胞上清液中HBV病毒拷貝量(×106)分別是3.75±0.35、6.05±0.48、10.28±1.01、20.86±1.81,各組間有統(tǒng)計學差異(F=14.761,P=0.002)。Southern-blot檢測表明Hep G2.2.15細胞上清中HBV DNA復制中間體相對量,在對照組和藥物處理組中分別為1.08±0.02和2.69±0.05,對照組和藥物處理組比較有統(tǒng)計學差異(t=58.33,P=0.000)。同樣,Hep G2-HBV1.1細胞內(nèi)HBV DNA復制中間體相對量,在對照組和藥物處理組中分別為1.03±0.01、3.52±0.05,對照組和藥物處理組比較有統(tǒng)計學差異(t=85.801,P=0.000)。該結果提示表柔比星促進細胞分泌或釋放更多的HBV到細胞上清液中。結論:表柔比星有直接的促HBV復制的作用,該作用可能成為化療后HBV再激活的新機制。
[Abstract]:Aim: to study the effect of ecrobicin on the replication of hepatitis B virus (hepatitis B virus,HBV) in vitro. Methods: 3-(4,5-dimethylthiazolyl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, 5-(4,5-dimethylthiazolyl)-2,5-diphenylthiazolyl-2,5-diphenyltetrazolium The effects of 0, 0.1, 0.5 and 1.0 渭 mol / L Epiromycin on the viability of HBV stable cell line Hep G2.2.15 and Hep G2-HBV1.1 cells were detected by MTT] assay. The drug was added directly to Hep G2.2.15 cells and Hep G2-HBV1.1 cells to extract the HBV replication intermediates in the cells and supernatant. The amount of HBV DNA replication was detected by real-time PCR and southern-blot methods. Results: after Hep G2.2.15 cells were treated with 0, 0.1, 0.2 and 0.5 渭 mol / L Epiromycin respectively, the intracellular HBV virus copy amount (脳 10 6) was 3.53 鹵0.26,5.39 鹵0.23,9.40 鹵0.92, 19.07 鹵1.47,respectively. There were statistical differences among the three groups (F = 10.984, P < 0.005). Similarly, Hep G2-HBV1.1 cells were treated with 0, 0.1, 0.2 and 0.5 渭 mol / L Epiromycin, respectively, and the intracellular HBV virus (脳 10 6) was 2.80 鹵0.37, 5.14 鹵0.49, 14.24 鹵1.29,26.59 鹵1.98, respectively. There were statistical differences among the three groups (F = 13.122, P < 0.01). The relative amount of HBV DNA replication intermediates in Hep G2.2.15 cells was (1.00 鹵0.01) in the control group (0 渭 mol / L Epiromycin) and in the treatment group (0.5 渭 mol / L Epiromycin), respectively. The relative amount of HBV DNA replication intermediates in Hep G2.2.15 cells was (1.00 鹵0.01). And (1.53 鹵0.05), There was a significant difference between the control group and the drug treatment group (t = 19.202, P = 0.002). Similarly, the relative amount of HBV DNA replication intermediates in Hep G2-HBV1.1 cells was 1.01 鹵0.02 in the control group and 3.12 鹵0.20 in the treatment group, and there was a significant difference between the control group and the drug treatment group (t = 18.034, P < 0.003). The above results suggested that Epiromycin promoted the replication of intracellular HBV. Hep G2.2.15 cells were treated with 0, 0.1, 0.2 and 0.5 渭 mol / L Epiromycin, respectively, and the cells were treated with 0, 0.1, 0.2 and 0.5 渭 mol / L EPROX, respectively. The amount of HBV virus replication in the supernatant was 2.37 鹵0.22,3.50 鹵0.27,6.02 鹵0.56, 17.74 鹵0.96, respectively, and there was significant difference among the three groups (F = 20.726, P < 0.001). Similarly, Hep G2-HBV1.1 cells were treated with 0, 0.1, 0.2 and 0.5 渭 mol / L Epiromycin, respectively, and the amount of HBV virus replication in the supernatant was 3.75 鹵0.35,6.05 鹵0.48,10.28 鹵1.01,20.86 鹵1.81, respectively, and that in the supernatant was 3.75 鹵0.35,6.05 鹵0.48,10.28 鹵1.01,20.86 鹵1.81, respectively. The relative amount of HBV DNA replication intermediates in the supernatant of Hep G2.2.15 cells was 1.08 鹵0.02 and 2.69 鹵0.05 in the control group and the drug treatment group, respectively, and the relative amount of HBV DNA replication intermediates in the supernatant of Hep G2.2.15 cells was 1.08 鹵0.02 and 2.69 鹵0.05 in the control group and the drug treatment group, respectively. There was a significant difference between the control group and the drug treatment group (t = 58.33, P < 0.000). Similarly, the relative amount of HBV DNA replication intermediates in Hep G2-HBV1.1 cells was 1.03 鹵0.01 in the control group and 3.52 鹵0.05 in the drug treatment group, and there was a significant difference between the control group and the drug treatment group (t = 85.801, P < 0.001). These results suggest that Epiromycin promotes the secretion or release of more HBV into the supernatant of cells. Conclusion: Epiromycin can directly promote the replication of HBV, which may be a new mechanism of HBV reactivation after chemotherapy.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科;重慶醫(yī)科大學病原生物學教研室;重慶醫(yī)科大學感染性疾病分子生物學教育部重點實驗室;
【基金】：國家臨床重點�？平ㄔO經(jīng)費資助項目【編號:(財社2010)305號】
【分類號】：R96

【參考文獻】

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【共引文獻】

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