【摘要】：細菌耐藥性已經(jīng)成為全球性問題,人類面臨“后抗生素時代”威脅�？s酚酸肽化合物是一類包含酯鍵的多肽,是由羥基酸和氨基酸由酯鍵和酰胺鍵連接構成的一類寡聚物。具有抗菌、抗病毒、抗血栓、抗蟲以及抗腫瘤等多種生物活性。其中�；s酚酸肽(α-cyldepsipetide,ADEP)作為一種新型抗菌肽,對耐藥菌有其獨特的抗性機制,其作用靶點是高度保守的細菌酪蛋白水解激酶(caseinolytic kinase,Clp P),ADEP通過結合Clp P,使細菌蛋白質水解不受調控,最終導致細菌死亡。Enopeptin A為ADEP家族的一員,具有抗病毒和抗包括耐甲氧西林-金黃色葡萄球菌在內的革蘭氏陽性菌以及細胞膜缺陷的革蘭氏陰性突變體。近年來,科學家通過化學合成的方法對Enopeptin進行結構修飾,獲得的衍生物抗耐藥菌活性得到大幅提升。本文通過對Enopeptin A發(fā)酵及分離純化工藝的研究,為該品種進行后續(xù)的結構修飾改造、構效關系的研究、以及新衍生物的開發(fā)奠定基礎,以期最終獲得具有抗病毒和抗耐藥菌雙重效果的新藥物。本課題對化合物Enopeptin A的研究與開發(fā)具有一定的原創(chuàng)性和實用價值。論文針對目標產(chǎn)物Enopeptin A建立了紫外-可見分光光度含量分析檢測法及HPLC分析檢測法。紫外-可見分光光度法的檢測波長為375 nm;HPLC的色譜條件為:色譜柱:Hypersil ODS2(250×4.6 mm,5μm);流動相:乙腈-1‰甲酸水(50:50);流速:1.0 m L/min;檢測波長:375 nm;柱溫:40℃;進樣量20μL。原始菌株SIIA-H7264(110μg/m L)通過紫外線、NTG、EMS以及常壓室溫等離子體等理化誘變選育,得到高產(chǎn)穩(wěn)定的突變株A-21(440μg/m L)。設計優(yōu)化了種子工藝、發(fā)酵控制條件,并經(jīng)單因素篩選及響應面法試驗,獲得最適發(fā)酵培養(yǎng)基配方,其組成為:葡萄糖2%,糊精8.85%,黃豆粉3%,硝酸鉀0.74%,氯化鈉0.2%,磷酸二氫鉀0.1%,碳酸鈣0.2%,p H 7.5。最佳發(fā)酵條件:接種量3%,培養(yǎng)溫度28℃,250 m L搖瓶培養(yǎng)基裝量為20 m L,搖床轉速220 r/min,發(fā)酵周期138h。在該條件下,Enopeptin A的產(chǎn)量達到1750μg/m L,相較于對照發(fā)酵產(chǎn)量440μg/m L,提高了2.98倍,比文獻報道的Enopeptin A的產(chǎn)量150μg/m L提高了10.67倍。對Enopeptin A的分離純化工藝進行了研究開發(fā),通過溶媒萃取及層析工藝,包括填料、層析系統(tǒng)等參數(shù)的研究,最終確定發(fā)酵液濾液和菌絲體分別采用大孔吸附樹脂層析及溶媒萃取進行Enopeptin A的粗制分離,后結合正相硅膠和反相硅膠多步層析的精制工藝路線,該提取工藝成本較低,并有效減少了有毒有機溶劑的使用,最終獲得的Enopeptin A產(chǎn)品HPLC純度達到95.0%以上,提取總收率達44%,開發(fā)了一條適宜于樣品放大制備的提取工藝路線。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：成都學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R915

【參考文獻】

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本文編號：2450443