發(fā)布時間：2019-03-30 15:31

【摘要】：目的:觀察皖南尖吻蝮蛇毒蛋白C激活劑(PCA)對人臍靜脈血管內皮細胞(HUVEC)的超微結構及其合成組織因子(TF)、血管性血友病因子(vWF)和內皮素-1(ET-1)水平的影響,并探討PCA的抗血栓機制。方法:實驗分為對照組(DMEM液)、脂多糖(LPS)組(LPS 0.1μg/ml)、PCA組(PCA 1μg/ml)、PCA+LPS組(1μg/ml PCA+0.1μg/ml LPS),加藥作用12 h后在透射電鏡下觀察各組細胞的內質網、線粒體形態(tài)及自噬體數量變化;ELISA檢測各組培養(yǎng)上清中TF、vWF、ET-1含量;RT-PCR檢測細胞內vWF、ET-1基因表達水平;Western blot檢測細胞內TF蛋白表達水平。結果:LPS組的HUVEC與對照組相比,細胞膜不光滑、出現凸起樣改變,并發(fā)生線粒體、內質網腫脹,自噬體數量增多等超微結構的改變,PCA組HUVEC的超微結構與對照組比無明顯變化;與LPS組相比,PCA+LPS組的HUVEC線粒體、內質網腫脹消失,自噬體數量明顯減少。與對照組相比,LPS組細胞培養(yǎng)上清中TF、vWF、ET-1的含量及細胞內vWF、ET-1基因、TF蛋白的表達水平顯著增高(P0.05);PCA組細胞培養(yǎng)上清及細胞內3種物質的表達量較對照組無顯著變化(P0.05);與LPS組相比,LPS+PCA組HUVEC培養(yǎng)上清及細胞內TF、vWF、ET-1的表達水平顯著降低(P0.05)。結論:1μg/ml的PCA可減輕LPS引起的HUVEC超微結構的改變,也可抑制LPS對HUVEC的TF、vWF、ET-1分泌量的增加作用。
[Abstract]:Objective: to observe the ultrastructure of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and its synthetic tissue factor (TF), (TF),) induced by protein C activator (PCA) from Agkistrodon acutus venom in southern Anhui. The effects of von Willebrand factor (vWF) and endothelin-1 (ET-1) levels and the antithrombotic mechanism of PCA were discussed. Methods: the experiment was divided into control group (DMEM solution), lipopolysaccharide (LPS) group (LPS 0.1 渭 g / ml), PCA group) and PCA 1 渭 g / ml), PCA LPS group (1 渭 g / ml PCA 0.1 渭 g / ml LPS),). The changes of endoplasmic reticulum (ER), mitochondrial morphology and autophagy were observed under transmission electron microscope (TEM) after 12 h treatment. ELISA was used to detect the content of TF,vWF,ET-1 in the supernatant, and RT-PCR was used to detect the expression level of vWF,ET-1 gene in cells.; Western blot was used to detect the expression level of intracellular TF protein. Results: compared with the control group, the membrane of HUVEC in LPS group was not smooth, there were bulge-like changes, mitochondria, endoplasmic reticulum swelling and autophagy increased. The ultrastructure of HUVEC in PCA group had no obvious change compared with control group. Compared with LPS group, the endoplasmic reticulum swelling disappeared and the number of autophagy decreased significantly in, PCA LPS group. Compared with the control group, the content of TF,vWF,ET-1 and the expression of vWF,ET-1 gene and TF protein in the supernatant of LPS group were significantly higher than those in the control group (P0.05). Compared with the control group, the expression levels of the three substances in the supernatant and intracellular cells of PCA group had no significant change (P0.05), but the expression level of HUVEC supernatant and intracellular TF,vWF,ET-1 in, LPS PCA group was significantly lower than that in, LPS PCA group (P0.05). Conclusion: (1) PCA (渭 g / ml) can reduce the ultrastructural changes of HUVEC induced by LPS and inhibit the increase of TF,vWF,ET-1 secretion of HUVEC induced by LPS.
【作者單位】： 皖南醫(yī)學院病理生理學教研室;皖南醫(yī)學院蛇毒研究室;皖南醫(yī)學院活性生物大分子研究安徽省重點實驗室;
【基金】：安徽省教育廳自然科學研究基金重點項目(KJ2011A266)
【分類號】：R96

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本文編號：2450207