【摘要】：目的:觀察皖南尖吻蝮蛇毒蛋白C激活劑(PCA)對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的超微結(jié)構(gòu)及其合成組織因子(TF)、血管性血友病因子(vWF)和內(nèi)皮素-1(ET-1)水平的影響,并探討PCA的抗血栓機(jī)制。方法:實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組(DMEM液)、脂多糖(LPS)組(LPS 0.1μg/ml)、PCA組(PCA 1μg/ml)、PCA+LPS組(1μg/ml PCA+0.1μg/ml LPS),加藥作用12 h后在透射電鏡下觀察各組細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體形態(tài)及自噬體數(shù)量變化;ELISA檢測(cè)各組培養(yǎng)上清中TF、vWF、ET-1含量;RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)vWF、ET-1基因表達(dá)水平;Western blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TF蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:LPS組的HUVEC與對(duì)照組相比,細(xì)胞膜不光滑、出現(xiàn)凸起樣改變,并發(fā)生線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹,自噬體數(shù)量增多等超微結(jié)構(gòu)的改變,PCA組HUVEC的超微結(jié)構(gòu)與對(duì)照組比無(wú)明顯變化;與LPS組相比,PCA+LPS組的HUVEC線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹消失,自噬體數(shù)量明顯減少。與對(duì)照組相比,LPS組細(xì)胞培養(yǎng)上清中TF、vWF、ET-1的含量及細(xì)胞內(nèi)vWF、ET-1基因、TF蛋白的表達(dá)水平顯著增高(P0.05);PCA組細(xì)胞培養(yǎng)上清及細(xì)胞內(nèi)3種物質(zhì)的表達(dá)量較對(duì)照組無(wú)顯著變化(P0.05);與LPS組相比,LPS+PCA組HUVEC培養(yǎng)上清及細(xì)胞內(nèi)TF、vWF、ET-1的表達(dá)水平顯著降低(P0.05)。結(jié)論:1μg/ml的PCA可減輕LPS引起的HUVEC超微結(jié)構(gòu)的改變,也可抑制LPS對(duì)HUVEC的TF、vWF、ET-1分泌量的增加作用。
[Abstract]:Objective: to observe the ultrastructure of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and its synthetic tissue factor (TF), (TF),) induced by protein C activator (PCA) from Agkistrodon acutus venom in southern Anhui. The effects of von Willebrand factor (vWF) and endothelin-1 (ET-1) levels and the antithrombotic mechanism of PCA were discussed. Methods: the experiment was divided into control group (DMEM solution), lipopolysaccharide (LPS) group (LPS 0.1 渭 g / ml), PCA group) and PCA 1 渭 g / ml), PCA LPS group (1 渭 g / ml PCA 0.1 渭 g / ml LPS),). The changes of endoplasmic reticulum (ER), mitochondrial morphology and autophagy were observed under transmission electron microscope (TEM) after 12 h treatment. ELISA was used to detect the content of TF,vWF,ET-1 in the supernatant, and RT-PCR was used to detect the expression level of vWF,ET-1 gene in cells.; Western blot was used to detect the expression level of intracellular TF protein. Results: compared with the control group, the membrane of HUVEC in LPS group was not smooth, there were bulge-like changes, mitochondria, endoplasmic reticulum swelling and autophagy increased. The ultrastructure of HUVEC in PCA group had no obvious change compared with control group. Compared with LPS group, the endoplasmic reticulum swelling disappeared and the number of autophagy decreased significantly in, PCA LPS group. Compared with the control group, the content of TF,vWF,ET-1 and the expression of vWF,ET-1 gene and TF protein in the supernatant of LPS group were significantly higher than those in the control group (P0.05). Compared with the control group, the expression levels of the three substances in the supernatant and intracellular cells of PCA group had no significant change (P0.05), but the expression level of HUVEC supernatant and intracellular TF,vWF,ET-1 in, LPS PCA group was significantly lower than that in, LPS PCA group (P0.05). Conclusion: (1) PCA (渭 g / ml) can reduce the ultrastructural changes of HUVEC induced by LPS and inhibit the increase of TF,vWF,ET-1 secretion of HUVEC induced by LPS.
【作者單位】： 皖南醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室;皖南醫(yī)學(xué)院蛇毒研究室;皖南醫(yī)學(xué)院活性生物大分子研究安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：安徽省教育廳自然科學(xué)研究基金重點(diǎn)項(xiàng)目(KJ2011A266)
【分類號(hào)】：R96

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本文編號(hào)：2450207