【摘要】：目的:目前,臨床上耐藥情況嚴(yán)重。一方面,治療腫瘤的主要手段是手術(shù)、放化療,而臨床所用的大部分化療藥物毒副作用大,且腫瘤細(xì)胞受本身的耐藥性及外界藥物的影響,出現(xiàn)大量腫瘤多藥耐藥細(xì)胞株,致使化療藥物療效大打折扣;另一方面,由于我們錯(cuò)誤的用藥習(xí)慣和用藥觀念,使得抗生素濫用現(xiàn)象日益嚴(yán)重,耐藥菌和超級(jí)耐藥菌隨之產(chǎn)生,導(dǎo)致臨床上原本有特效的抗生素對(duì)耐藥菌作用越來越小,許多治療手段逐漸失效。若該現(xiàn)象不能得以改善,全球由于耐藥而造成的死亡將急劇上升,其中亞洲區(qū)占據(jù)約一半的比例。因此,尋找新型具有抗腫瘤或抗生素活性的先導(dǎo)化合物迫在眉睫。隨著人們對(duì)化學(xué)藥品毒副作用的深入認(rèn)識(shí)及全球范圍內(nèi)提倡回歸自然的態(tài)度,國際上對(duì)天然藥物的重視程度在不斷加強(qiáng),并且天然藥物具有高效低毒的特點(diǎn),故而天然藥物是未來藥物發(fā)展的大趨勢(shì)。天然藥物來源廣泛,其微生物來源主要包括放線菌、真菌和細(xì)菌三大類,其中,放線菌占比約45%。Selman Waksman通過系統(tǒng)檢測土壤微生物,發(fā)現(xiàn)其中鏈霉菌是放線菌中最主要最大的微生物來源,占比高達(dá)90%。其次級(jí)代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)豐富,活性廣泛,可用于抗腫瘤、抗瘧疾、抗蟲、抗菌、抗病毒、免疫抑制等領(lǐng)域。自抗生素挖掘的黃金時(shí)代拉開序幕以來,大量活性顯著的天然產(chǎn)物從鏈霉菌中被獲得,目前,2/3應(yīng)用于臨床的抗生素來源于鏈霉菌,其中包括治療結(jié)核病的首選藥物鏈霉素、治療霍亂及鼠疫的四環(huán)素、治療傷寒及副傷寒的首選藥物氯霉素、治療細(xì)菌感染的萬古霉素等。由此可見,鏈霉菌是挖掘具有重要價(jià)值的天然藥物的主要來源,被稱為天然藥物的合成工廠,是放線菌中最有商業(yè)價(jià)值的種類之一。目前,對(duì)鏈霉菌的研究范圍主要集中在土壤和海洋兩大來源,因此,本課題以兩株鏈霉菌,一株土壤來源鏈霉菌,一株海洋來源鏈霉菌為出發(fā)菌株,探索新型具有抗腫瘤或抗生素活性的先導(dǎo)化合物。方法:通過抗菌活性測試、培養(yǎng)條件優(yōu)化及HPLC-DAD檢測分析等生物化學(xué)組合篩選模型,從來源于漠河和黃山的八株陸生放線菌中篩選出一株放線菌Streptomyces nojiriensis SYSUS00008,并從課題組中挑選出一株來源于南海深海的放線菌Streptomyces lusitanus SCSIO LR32為目標(biāo)菌株,分別采用ISP2和Modified RA(含海鹽)培養(yǎng)基發(fā)酵,經(jīng)硅膠柱層析、中壓反相制備、Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱及半制備高效液相色譜等分離純化手段獲得化合物單體,并采用HR-ESI-MS及NMR等波譜數(shù)據(jù)分析,結(jié)合文獻(xiàn)檢索,鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu);通過抗菌活性測試、體外細(xì)胞毒活性篩選等方式,發(fā)現(xiàn)具有活性的化合物。結(jié)果:1.從來源于漠河土壤中的鏈霉菌Streptomyces nojiriensis SYSUS00008的發(fā)酵產(chǎn)物中分離到10個(gè)吩嗪類及其前體化合物,鑒定出5個(gè)化合物,分別為izuminoside A(1),izuminoside D(2),olphenazines E(3),N-(2-Hydroxyphenyl)-acetamide(6),diastaphenazine(8),其中izuminoside D(2)為新結(jié)構(gòu)化合物。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道吩嗪類化合物在抗癌、抗生素、生物膜消滅領(lǐng)域有廣泛的活性。天然吩嗪化合物有廣譜的抗菌抑菌活性,不僅對(duì)小麥全蝕病、水稻枯萎病等病原菌有顯著抑制作用,還可用于肺結(jié)核、白血病、結(jié)核桿菌和非典型耐酸桿菌及麻風(fēng)病等疾病的治療,在醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)領(lǐng)域受到重視。2.從來源于南海深海的鏈霉菌Streptomyces lusitanus SCSIO LR32的發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到6個(gè)角環(huán)素類(蒽醌類)化合物,分別為化合物grincamycin I(11),grincamycin J(12),grincamycin K(13),A-7884(14),grincamycin B(15)和grincamycin(16),其中化合物grincamycin I-K(11-13)為新化合物。針對(duì)5株人腫瘤細(xì)胞(乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-435和MDA-MB-231、人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系NCI-H460、人結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT-116、人肝癌細(xì)胞系Hep-G2)和1株人正常乳腺上皮細(xì)胞系MCF-10A對(duì)新化合物grincamycin I-K(11-13)以及已知化合物A-7884(14)進(jìn)行體外細(xì)胞毒性活性測試,篩選結(jié)果顯示,grincamycin J(12)和A-7884(14)具有明顯的細(xì)胞毒活性,對(duì)上述細(xì)胞的IC50值在0.4-6.9μM之間,grincamycin I(11)對(duì)6種細(xì)胞株均表現(xiàn)出中等活性,IC50值范圍在2.9-25.9μM之間,而grincamycin K(13)活性微弱。此外,A-7884(14)對(duì)藤黃微球菌有較好的抑制作用,MIC值為1.95μg/mL。結(jié)論:來源于漠河土壤中的鏈霉菌Streptomyces nojiriensis SYSUS00008孕育豐富的吩嗪類化合物,而來源于南海深海的鏈霉菌Streptomyces lusitanus SCSIO LR32生產(chǎn)大量的角環(huán)素類化合物,是活性先導(dǎo)化合物的重要源泉。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R915

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 郭凱;胡志鈺;鄭忠輝;徐慶妍;;來源于鏈霉菌Streptomyces albiflaviniger菌株YN-10-2的納皮拉霉素類化合物的結(jié)構(gòu)和活性[J];廈門大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2016年04期

2 肖麗萍;鄧子新;劉天罡;;鏈霉菌底盤細(xì)胞的開發(fā)現(xiàn)狀及其應(yīng)用[J];微生物學(xué)報(bào);2016年03期

3 程舉;張孝龍;趙江源;文孟良;丁章貴;李銘剛;;近年鏈霉菌次生代謝產(chǎn)物研究進(jìn)展[J];中國抗生素雜志;2015年10期

4 代芳平;李師翁;;鏈霉菌次級(jí)代謝物及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2014年03期

5 任香梅;黃洪波;劉靜;張?jiān)?馬俊英;王博;張長生;鞠建華;;海洋鏈霉菌Streptomyces lusitanus SCSIO LR32中芳酰胺類代謝產(chǎn)物的研究[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2011年04期

，

本文編號(hào)：2433877