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蜂毒素對(duì)人肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用及其機(jī)制探討

發(fā)布時(shí)間:2019-02-18 21:42
【摘要】:目的研究蜂毒素對(duì)人肝癌細(xì)胞(Hep G2、SMMC-7721)生長(zhǎng)的抑制作用及其機(jī)制。方法采用MTT法檢測(cè)蜂毒素對(duì)Hep G2和SMMC-7721細(xì)胞增殖的抑制作用,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)細(xì)胞中microRNA-203(mir-203)以及PIK3CA mRNA的表達(dá)變化,Western blot法檢測(cè)磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)的表達(dá)變化,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人mir-203 mimics過(guò)表達(dá)mir-203后應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot檢測(cè)mir-203對(duì)PI3K/AKT信號(hào)通路的作用。結(jié)果與正常組比較,蜂毒素處理組細(xì)胞增殖明顯受到抑制,并呈濃度依賴性;實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示蜂毒素(1、2、4mg/L)可以明顯升高mir-203的表達(dá),PIK3CA mRNA的表達(dá)無(wú)明顯改變;Western blot法結(jié)果顯示蜂毒素(1、2、4 mg/L)可以降低PI3K以及P-AKT蛋白的表達(dá)。在Hep G2和SMMC-7721細(xì)胞中過(guò)表達(dá)mir-203后,與正常組及轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照組比較,PIK3CA mRNA的表達(dá)無(wú)明顯改變但PI3K以及P-AKT的蛋白表達(dá)降低。結(jié)論蜂毒素能抑制Hep G2和SMMC-7721細(xì)胞的增殖,其機(jī)制可能是通過(guò)上調(diào)mir-203的表達(dá),進(jìn)而在轉(zhuǎn)錄后水平靶向抑制PI3K的表達(dá),抑制PI3K/AKT信號(hào)通路的活化。
[Abstract]:Objective to study the inhibitory effect of melittin on the growth of human hepatoma cell line (Hep G _ 2 + SMMC-7721) and its mechanism. Methods MTT assay was used to detect the inhibitory effect of melittin on the proliferation of Hep G2 and SMMC-7721 cells. The expression of microRNA-203 (mir-203) and PIK3CA mRNA in Hep G2 and SMMC-7721 cells were detected by real-time quantitative PCR, and phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) was detected by, Western blot method. The expression of phosphorylated protein kinase B (P-AKT) was detected by real-time quantitative PCR and Western blot. The effect of mir-203 on PI3K/AKT signaling pathway was detected by real-time quantitative PCR and Western blot. Results compared with the normal control group, the cell proliferation of the treated group was inhibited in a dose-dependent manner, and the results of real-time quantitative PCR showed that the expression of mir-203 was significantly increased by melittin (1 2 mg / L), but the expression of PIK3CA mRNA was not changed. The results of Western blot assay showed that the expression of PI3K and P-AKT protein was decreased by melittin (1 mg/L). After overexpression of mir-203 in Hep G2 and SMMC-7721 cells, the expression of PIK3CA mRNA did not change, but the expression of PI3K and P-AKT decreased. Conclusion melittin can inhibit the proliferation of Hep G2 and SMMC-7721 cells by up-regulating the expression of mir-203 and then inhibiting the expression of PI3K and the activation of PI3K/AKT signal pathway at post-transcriptional level.
【作者單位】: 安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院;安徽醫(yī)科大學(xué)肝病研究所安徽省高校產(chǎn)業(yè)共性技術(shù)研究院;
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào):81273526)
【分類號(hào)】:R96

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào):2426243

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