【摘要】：目的:FCPR16是本實(shí)驗(yàn)室合成的新型磷酸二酯酶4(PDE4)抑制劑,具有潛在的抗炎作用。本研究利用SH-SY5Y細(xì)胞建立氧糖剝奪(OGD)模型,以及建立大鼠大腦中動脈阻塞(MCAO)模型,探究FCPR16對腦缺血再灌注損傷的作用及可能的潛在機(jī)制。方法:1.進(jìn)行SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng),利用Na2S204建立OGD模型;采用CCK-8法檢測FCPR16對OGD造模后細(xì)胞活力的影響;利用流式細(xì)胞術(shù)、TUNEL染色、線粒體膜電位檢測的方法分析FCPR16對OGD造模后細(xì)胞凋亡的作用:Western blot法檢測FCPR16對相關(guān)凋亡蛋白變化的影響;分離提取細(xì)胞線粒體蛋白和胞漿蛋白,Western blot法檢測FCPR16對線粒體和胞漿中Cyt C蛋白變化的影響;Western blot檢測FCPR16對OGD造模后CREB、p-CREB的作用。2.采用線栓法建立MCAO模型;大鼠缺血2 h后,腹腔注射2.5、5、10 mg/kg FCPR16,再灌注24 h,進(jìn)行神經(jīng)功能行為評分;TTC染色測定FCPR16對MCAO模型大鼠腦梗死面積的影響;利用HE染色觀察腦組織的形態(tài)學(xué)變化;用ELISA法和Western bolt法分別檢測FCPR16對血清和腦組織中炎癥因子含量變化的影響;通過免疫熒光和Western bolt的方法檢測Iba-1和GFAP的表達(dá)情況;TUNEL染色檢測FCPR16對MCAO模型大鼠細(xì)胞凋亡的作用,Western bolt法檢測凋亡相關(guān)蛋白的變化情況;用ELISA法檢測腦組織中cAMP的含量,Western bolt法檢測FCPR16對CREB、p-CREB表達(dá)變化的影響。結(jié)果:第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):1.利用10mmol/LNa2S2O4和無糖培養(yǎng)基處理SH-SY5Y細(xì)胞4 h,再培養(yǎng)24 h,建立OGD模型。5 μM、10 μM和20 μM FCPR16能呈濃度依賴性地提高OGD造模后細(xì)胞的存活率。2.流式細(xì)胞術(shù)、TUNEL染色結(jié)果表明,5μM、10μM和20μMFCPR16能夠在不同程度上減少OGD造模后細(xì)胞的凋亡。3.線粒體膜電位檢測發(fā)現(xiàn)FCPR16能夠減弱OGD造模后線粒體膜電位的下降。Western bolt結(jié)果發(fā)現(xiàn)FCPR16減少OGD造模后細(xì)胞中Caspase-3的含量,增加Bcl-2/Bax的比值和磷酸化Akt蛋白水平,以及減少細(xì)胞線粒體的Cyt C向胞漿中的釋放。4.FCPR16能夠增加OGD造模后CREB磷酸化水平。第二部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):1.2.5,5,10 mg/kg FCPR16能不同程度地改善MCAO大鼠的神經(jīng)功能癥狀,減少腦梗死面積。HE染色結(jié)果表明FCPR16能改善MCAO模型大鼠腦組織的病理性變化和減輕水腫。2.MCAO造模后大鼠血清和缺血腦組織中炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β的含量顯著增加,2.5,5,10mg/kg FCPR16能劑量依賴性的降低這些炎癥因子的增加。3.免疫熒光和Western bolt結(jié)果表明FCPR16減弱了大鼠缺血腦組織中GFAP和Iba-1的表達(dá)水平。4.FCPR16減少M(fèi)CAO大鼠的神經(jīng)細(xì)胞凋亡,減少腦組織中Caspase-3的含量,增加Bcl-2/Bax,以及增加磷酸化Akt表達(dá)水平。5.FCPR16增加MCAO大鼠腦組織中cAMP的含量,增加磷酸化CREB的表達(dá)水平。結(jié)論:1.PDE4抑制劑FCPR16能提高OGD造模后SH-SY5Y細(xì)胞的存活率,改善由線粒體途徑介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,其作用可能與激活CREB通路有關(guān)。2.FCPR16能改善MCAO大鼠的神經(jīng)功能癥狀,減少腦梗死面積,改善腦組織病理性變化。其機(jī)制可能與減少炎癥因子含量,抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活,減少神經(jīng)細(xì)胞的凋亡,激活cAMP/CREB路通有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R965

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 YUAN Yan;PAN Shu;YANG Shi-Lin;LIU Yan-Li;XU Qiong-Ming;;Antioxidant and cardioprotective effects of Ilex cornuta on myocardial ischemia injury[J];Chinese Journal of Natural Medicines;2017年02期

2 劉旭;程玉芳;張漢霆;徐江平;;咯利普蘭對局灶性腦缺血-再灌注損傷大鼠學(xué)習(xí)記憶及海馬PDE4活性的影響[J];中國病理生理雜志;2008年06期

，

本文編號：2422746