【摘要】：[目的]分離純化松蘿中具有抗腫瘤活性的功效化合物并對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析,檢測功效化合物體外抗腫瘤作用的劑量效應(yīng)與時間效應(yīng)關(guān)系。觀察功效化合物與順鉑聯(lián)合用藥時對人癌細(xì)胞株的體外抗腫瘤作用的聯(lián)合用藥的作用形式和強(qiáng)度。通過人癌裸鼠移植瘤模型進(jìn)一步觀察該化合物在體內(nèi)的抗腫瘤作用。采用流式細(xì)胞技術(shù)和基因芯片技術(shù)初步探討松蘿功效化合物的抗腫瘤作用機(jī)制。[方法]1、采用溶劑萃取、硅膠柱層析和重結(jié)晶技術(shù)對松蘿功效化合物進(jìn)行分離純化,并通過核磁共振技術(shù)和質(zhì)譜對化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。2、采用體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗,通過MTT法檢測不同濃度的功效化合物對人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(A549)、人肝癌細(xì)胞株(HepG2)、宣威肺癌細(xì)胞(XWLC-05)、人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞(NCI-H157)、人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞(H460)、人移行膀胱癌細(xì)胞(T24)、鼻咽癌細(xì)胞(CNE)等八種人癌細(xì)胞株以及人正常肺上皮細(xì)胞(BASE-2B)的體外增殖抑制作用。3、采用體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗,通過MTT法檢測不同濃度的功效化合物與順鉑聯(lián)合作用時對宣威肺癌細(xì)胞(XWLC-05)、人移行膀胱癌細(xì)胞(T24)的體外增殖抑制作用,并通過金氏公式來判斷功效化合物與臨床抗腫瘤藥物聯(lián)合抗腫瘤作用。4、采用人癌裸鼠移植瘤模型,通過測量腫瘤的長徑、短徑來觀察腫瘤的體積變化,觀察功效化合物體內(nèi)抗腫瘤作用。精確稱量體重和主要臟器質(zhì)量,計算臟器系數(shù),并檢測血常規(guī)、血生化指標(biāo),初步觀察該化合物的毒性。5、采用流式細(xì)胞技術(shù),通過PI單染色法對細(xì)胞進(jìn)行染色,分析功效化合物對HepG2細(xì)胞周期分布的影響。6、通過基因芯片技術(shù)檢測松蘿功效化合物對乳腺癌細(xì)胞MCF-7基因表達(dá)的影響,并對顯著性差異基因的功能分類、基因組信息以及參與的信號通路進(jìn)行顯著性分析。[結(jié)果]1、從松蘿中分離純化得到一個功效化合物,分子式為C10H10O5,分子量210,確認(rèn)其結(jié)構(gòu)式為2,4-二羥基-3-醛基-6甲基苯甲酸甲酯(即赤星衣酸甲酯)。2、赤星衣酸甲酯在劑量2、4、8、16與32μg/ml下作用72h,對A549、HepG2、XWLC-05、MCF-7、H157、H460、T24、CNE具有顯著的體外增殖抑制作用,且隨藥物濃度的升高而增強(qiáng),具有顯著的劑量效應(yīng)關(guān)系。3、赤星衣酸甲酯在劑量2、4、8、16與32μg/ml下對A549作用24h的抑制率為 3.09%、4.40%、20.03%、52.45%、76.89%;48h 的抑制率為 2.17%、6.75%、19.73%、60.9%、86.72%;72h 的抑制率為 5.99%、8.30%、14.18%、56.63%、91.45%,表明該化合物對A549的體外抗腫瘤作用具有時間效應(yīng)關(guān)系。4、赤星衣酸甲酯對細(xì)胞 A549、HepG2、XWLC-05、MCF-7、H157、H460、T24、CNE 的 IC50 分別為 13.388 μg/ml、11.784 μg/ml、8.771 μg/ml、13.188 μg/ml、25.165 μg/ml、28.719 μg/ml、7.598 μg/ml 和 18.475 μg/ml。2、4、8 μg/ml 的赤星衣酸甲酯對人正常肺上皮細(xì)胞(BASE-2B)影響較小。表明赤星衣酸甲酯體外抗腫瘤作用具有細(xì)胞靶向性和細(xì)胞選擇性。5、赤星衣酸甲酯與順鉑聯(lián)合用藥作用于XWLC-05的q值分別為0.56、0.55、0.708;作用于T24的q值分別為0.717、1.046、1.01。表明赤星衣酸甲酯與DDP聯(lián)用對XWLC-05細(xì)胞具有體外拮抗作用;4、8μg/mL的赤星衣酸甲酯與DDP聯(lián)用對T24細(xì)胞具有體外相加作用。6、赤星衣酸甲酯對裸鼠體內(nèi)移植HepG2具有顯著的體內(nèi)生長抑制作用。赤星衣酸甲酯在劑量5mg/kg下作用時間分別為4、8、12、16、20、24、28、32天的裸鼠腫瘤的相對增殖率分別為69.3%、71.9%、54.4%、52.4%、49.5%、46.9%、49.5%、46.6%,表明化合物對對裸鼠移植性肝癌的的抗腫瘤作用具有時間效應(yīng)關(guān)系。7、赤星衣酸甲酯作用組的肝臟、脾臟的臟器系數(shù)均低于對照組;紅細(xì)胞數(shù)、白蛋白以及球蛋白均高于對照組。表明該化合物在體內(nèi)抗腫瘤作用中能提高紅細(xì)胞數(shù)以及免疫蛋白水平。8、HepG2細(xì)胞在赤星衣酸甲酯的作用下,G0/G1期的細(xì)胞數(shù)量顯著高于陰性對照組DMSO,表明該化合物能將HepG2細(xì)胞的增殖阻滯在G0/G1期,使進(jìn)入S期和G2/M期的細(xì)胞數(shù)量減少,從而抑制細(xì)胞分裂。9、赤星衣酸甲酯作用組與對照組比較具有顯著差異的mRNA有2394個,LncRNA有2187個(差異倍數(shù)1.5)。采用基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)圖篩選出與其他基因共表達(dá)最多的基因PLCB4。通過對顯著性差異基因的功能以及所參與的信號通路進(jìn)行分析,共得到393條功能分類和93條信號通路。[結(jié)論]赤星衣酸甲酯為首次從該松蘿中分離得到的化合物,在體內(nèi)、體外均具有顯著的抗腫瘤作用,且具有劑量效應(yīng)和時間效應(yīng)關(guān)系,能影響腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期和基因表達(dá)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2415891