【摘要】：研究目的 為了給苯胺洛芬滴眼液的進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)以及臨床推廣提供相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，本研究以新西蘭兔為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）技術(shù)，對(duì)苯胺洛芬滴眼液新西蘭兔單次、多次滴眼給藥藥物代謝動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究。建立新西蘭兔眼部樣品（角膜、結(jié)膜、淚液、房水）中聯(lián)苯乙酸定量分析的LC-MS/MS方法；并準(zhǔn)確測(cè)定新西蘭兔單次、多次滴眼給藥苯胺洛芬滴眼液后眼部樣品中聯(lián)苯乙酸的濃度；最后根據(jù)測(cè)定的聯(lián)苯乙酸數(shù)據(jù)結(jié)果計(jì)算其相應(yīng)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)，，并對(duì)藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行相關(guān)分析，以此對(duì)苯胺洛芬滴眼液新西蘭兔單次、多次滴眼給藥后，苯胺洛芬在新西蘭兔眼內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)過(guò)程進(jìn)行科學(xué)評(píng)價(jià)。 研究方案 建立新西蘭兔眼部樣品（角膜、結(jié)膜、淚液、房水）中聯(lián)苯乙酸定量分析的LC-MS/MS方法。質(zhì)譜方法：電噴霧離子源，負(fù)離子掃描模式，多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)，相應(yīng)定量離子對(duì)分別為聯(lián)苯乙酸m/z211.1m/z166.9、丙磺舒m/z283.9m/z239.9。液相方法：Venusil MP C18色譜柱（100mm×4.6mm I.D.,5um粒徑），乙腈-5mM乙酸銨溶液（含0.1%甲酸）（70:30，v/v）作為流動(dòng)相，40°C的柱溫箱溫度，30uL的進(jìn)樣量，每個(gè)樣品檢測(cè)分析時(shí)間僅為2.5min，內(nèi)標(biāo)為丙磺舒。樣品前處理方法：角膜、結(jié)膜組織樣品制備成勻漿液后進(jìn)行提取，濾紙片上的淚液樣品制備成萃取液后進(jìn)行提取，房水直接進(jìn)行提取。提取方法為液液萃取，提取試劑為乙醚：二氯甲烷（3:2，v/v）。本方法按照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局（ChinaFood and Drug Administration，CFDA）指導(dǎo)原則要求，分別從線性范圍、最低定量下限、專屬性、精密度、準(zhǔn)確度、提取回收率、基質(zhì)效應(yīng)和樣品穩(wěn)定性等方面進(jìn)行完全方法確證。 利用所建立的LC-MS/MS定量分析方法分別測(cè)定了新西蘭兔單次、多次滴眼給藥苯胺洛芬滴眼液后眼部樣品（角膜、結(jié)膜、淚液、房水）中聯(lián)苯乙酸的濃度，并且繪制了藥物濃度-時(shí)間曲線。根據(jù)藥物濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)求出相關(guān)藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)（達(dá)峰濃度、達(dá)峰時(shí)間、消除半衰期、藥-時(shí)曲線下面積），并對(duì)上述藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行相關(guān)分析，考察苯胺洛芬滴眼液新西蘭兔單次、多次滴眼給藥后，苯胺洛芬在新西蘭兔眼內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)特征。 研究結(jié)果 本研究建立了測(cè)定新西蘭兔眼部樣品（角膜、結(jié)膜、淚液、房水）中聯(lián)苯乙酸濃度的LC-MS/MS定量分析方法，該方法具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏、專屬性強(qiáng)、樣品用量少（100uL）等優(yōu)點(diǎn)。該方法在1-300ng/mL的范圍內(nèi)線性良好，最低定量下限可達(dá)到1ng/mL；待測(cè)物聯(lián)苯乙酸和內(nèi)標(biāo)丙磺舒的檢測(cè)不受內(nèi)源性物質(zhì)的干擾；方法的準(zhǔn)確度和精密度均滿足相關(guān)要求；樣品提取回收率高并且穩(wěn)定；待測(cè)物聯(lián)苯乙酸和內(nèi)標(biāo)丙磺舒的檢測(cè)不受基質(zhì)效應(yīng)的影響；樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明：樣品經(jīng)反復(fù)凍融三次、-80°С放置3個(gè)月、處理前室溫放置4h、處理后室溫放置4h后均穩(wěn)定。本方法符合國(guó)家相關(guān)規(guī)范要求，能夠滿足臨床前藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究的要求，可用于苯胺洛芬滴眼液新西蘭兔單次、多次滴眼給藥后藥物代謝動(dòng)力學(xué)的相關(guān)研究。 苯胺洛芬滴眼液新西蘭兔單次滴眼給藥后，角膜、結(jié)膜、淚液和房水中待測(cè)物聯(lián)苯乙酸的各藥代參數(shù)如下：Cmax分別為4059.86±1128.98ng/g、725.13±196.49ng/g、54909.02±9014.14ng/g和272.39±51.62ng/mL；Tmax分別為0.08±0.00h、0.08±0.00h、0.08±0.00h和0.55±0.28h；t1/2分別為2.20±1.53h、2.25±1.67h、1.97±1.06h和3.43±0.32h；AUC0-t分別為8214.22±1375.48h·ng/g、3152.61±1117.28h·ng/g、43597.73±14526.74h·ng/g和667.95±37.28h·ng/g；AUC0-∞分別為8222.48±1991.46h·ng/g、3157.20±1147.21h·ng/g、43698.42±11348.42h·ng/g和668.59±40.58h·ng/g。 苯胺洛芬滴眼液新西蘭兔多次滴眼給藥后，角膜、結(jié)膜、淚液和房水中待測(cè)物聯(lián)苯乙酸的各藥代參數(shù)如下：Cmax分別為5133.24±1556.24ng/g、1434.13±884.93ng/g、21828.41±8102.18ng/g和336.67±136.96ng/mL；Tmax分別為0.08±0.00h、0.08±0.00h、0.08±0.00h和0.46±0.10h；t1/2分別為2.25±1.55h、2.32±1.42h、2.07±1.20h和3.49±0.20h；AUC0-t分別為11659.91±3582.47h·ng/g、4081.22±1659.62h·ng/g、37547.48±1029.03h·ng/g和700.02±93.55h·ng/g；AUC0-∞分別為11660.38±3901.95h·ng/g、4088.62±1724.84h·ng/g、37581.26±1923.01h·ng/g和700.98±93.54h·ng/g。 比較上述各藥代參數(shù)可知：苯胺洛芬滴眼液新西蘭兔多次滴眼給藥后，在角膜、結(jié)膜中可能有輕度蓄積傾向，臨床用藥應(yīng)多關(guān)注其藥物濃度和不良反應(yīng)；在房水中無(wú)蓄積傾向；多次滴眼給藥可能會(huì)刺激淚液分泌增多，使得淚液對(duì)藥物濃度起到了稀釋的作用。 綜上所述，本研究為苯胺洛芬滴眼液的進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)以及臨床推廣提供了相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。
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【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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1 呂早生;張琳涵;余騰飛;黃吉林;胡亞;趙金龍;;非甾體抗炎藥聯(lián)苯乙酸的合成綜述[J];廣州化工;2011年20期

2 鐘大放;以加權(quán)最小二乘法建立生物分析標(biāo)準(zhǔn)曲線的若干問(wèn)題[J];藥物分析雜志;1996年05期

本文編號(hào)：2415155