【摘要】：利用基因工程技術表達能夠促使腫瘤細胞DU145凋亡的腫瘤壞死因子α(TNFα)的衍生物TRSP10,并在體外研究其對DU145細胞的抑制效應。以重疊延伸PCR方法合成TRSP10基因序列,并插入高效表達的質粒載體p KYB-MCS的NdeⅠ和SapⅠ酶切位點之間,優(yōu)化融合蛋白誘導表達的條件,建立了從載體構建到重組菌表達、制備的工藝技術條件。MTT法檢測TRSP10對前列腺癌細胞DU145增殖的抑制作用。實驗結果表明:重組菌ER2566誘導表達可溶性融合蛋白的最佳條件是誘導劑IPTG濃度為0.8 mmol/L、誘導表達溫度37℃、誘導表達時間8h。利用IMPACT系統(tǒng)及HPLC技術純化制備TRSP10,得到產物純度達到96%,質譜鑒定確定其分子質量為3.59k Da,與理論值相符;體外細胞學研究結果表明,TRSP10對前列腺癌細胞DU145有明顯的抑制作用,在5,10,20,40μmol/L TRSP10及10μmol/L TNFα陽性對照處理后48h抑制率分別達到11.40%,22.97%,33.26%,48.35%及42.50%。
[Abstract]:Expression of tumor necrosis factor 偽 (TNF 偽) derivative of tumor necrosis factor 偽 (TNF 偽) and its inhibitory effect on DU145 cells were studied in vitro. The sequence of TRSP10 gene was synthesized by overlapping extension PCR and inserted between the Nde 鈪，

本文編號：2413517