【摘要】：由于人們在現(xiàn)代生活節(jié)奏下不規(guī)律的作息和對電子產(chǎn)品的過度依賴，眼科疾病的發(fā)病率近年來呈爆發(fā)的趨勢。愛爾卡因和加替沙星分別是眼科常用的局部麻醉劑和抗菌藥物，在眼科圍手術(shù)期經(jīng)常配合使用。隨著其應(yīng)用的普及，其對患者的毒副作用的影響也日益顯現(xiàn)，人們普遍開始關(guān)注這兩種藥物的毒副作用。角膜基質(zhì)層位于整個角膜結(jié)構(gòu)的中間位置，是一層結(jié)締組織，占據(jù)整個角膜厚度的90%。其獨特結(jié)構(gòu)很大程度上決定了角膜的性質(zhì)和功能。 本文利用實驗室自主建立的非轉(zhuǎn)染、無致瘤性的人角膜基質(zhì)細(xì)胞系為實驗材料，通過光學(xué)顯微鏡觀察、MTT細(xì)胞活力檢測、AO/EB熒光雙染色、提取DNA的瓊脂糖凝膠電泳、透射電鏡觀察、流式細(xì)胞儀檢測、ELISA實驗等手段觀察并研究了愛爾卡因和加替沙星這兩種藥物對體外培養(yǎng)的人角膜基質(zhì)細(xì)胞的影響，并進一步研究其毒性機理，為這兩種藥物在臨床上的安全使用提供參考。 將愛爾卡因從臨床濃度5g/L開始倍比稀釋用于實驗，實驗結(jié)果顯示0.078125g/L~5g/L濃度的愛爾卡因能引起HCS細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化，如皺縮變圓、空泡化、脫壁死亡等，其中5g/L和2.5g/L的毒性作用極強。MTT檢測表明，0.625g/L~5g/L濃度的愛爾卡因處理HCS細(xì)胞后，細(xì)胞的比活力顯著降低，說明這一濃度范圍對HCS細(xì)胞的毒性作用較強。熒光雙染色結(jié)果表明0.078125g/L~5g/L濃度的愛爾卡因會不同程度地提高HCS細(xì)胞的質(zhì)膜通透性，尤其0.625g/L~5g/L的愛爾卡因?qū)CS細(xì)胞影響很大，所有這些影響都有時間和濃度的依賴性。1%瓊脂糖凝膠電泳驗證了0.625g/L和1.25g/L愛爾卡因能引起HCS細(xì)胞發(fā)生DNA斷片化。用1.25g/L的愛爾卡因處理的HCS細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化顯示，細(xì)胞出現(xiàn)了胞質(zhì)空泡化、染色質(zhì)凝縮、凋亡小體形成等結(jié)構(gòu)變化，這與發(fā)生凋亡的細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化一致，說明愛爾卡因能誘導(dǎo)HCS細(xì)胞發(fā)生凋亡。凋亡時相檢測結(jié)果表明，1.25g/L愛爾卡因處理HCS細(xì)胞的16h內(nèi)，細(xì)胞經(jīng)歷了正常-早期凋亡-晚期凋亡的不同時相。1.25g/L愛爾卡因處理HCS細(xì)胞后，細(xì)胞周期發(fā)生停滯，停留在G1期。1.25g/L愛爾卡因處理HCS細(xì)胞后6h內(nèi)，細(xì)胞的線粒體膜電位顯著降低。1.25g/L愛爾卡因處理HCS細(xì)胞后，caspase-9首先被激活，激活的caspase-9進一步激活caspase-3，表明愛爾卡因處理后的HCS細(xì)胞可能發(fā)生了線粒體參與介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，但還有待進一步的研究。 加替沙星的實驗結(jié)果顯示0.375g/L~3g/L的加替沙星會引起HCS細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化，如皺縮變圓、空泡化、脫壁死亡等，其中1.5g/L~3g/L的毒性作用較大。MTT檢測表明，0.375g/L~3g/L濃度的加替沙星處理HCS細(xì)胞后，細(xì)胞的比活力顯著降低，說明這一濃度范圍對HCS細(xì)胞的毒性作用較強。0.375g/L~3g/L濃度的加替沙星會不同程度地提高HCS細(xì)胞的質(zhì)膜通透性，尤其1.5g/L和3g/L的加替沙星對HCS細(xì)胞影響很大，，所有這些影響都有時間和濃度的依賴性。1%瓊脂糖凝膠電泳驗證了0.75g/L和1.5g/L替沙星能引起HCS細(xì)胞發(fā)生DNA斷片化。用1.5g/L的加替沙星處理的HCS細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化顯示，細(xì)胞出現(xiàn)了胞質(zhì)空泡化、染色質(zhì)凝縮、凋亡小體形成等結(jié)構(gòu)變化，這與發(fā)生凋亡的細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化一致，說明加替沙星誘導(dǎo)HCS細(xì)胞發(fā)生凋亡。凋亡時相檢測結(jié)果表明，1.5g/L加替沙星處理HCS細(xì)胞的12h內(nèi)，細(xì)胞經(jīng)歷了正常-早期凋亡-晚期凋亡的不同時相變化。1.5g/L加替沙星處理HCS細(xì)胞后，細(xì)胞周期發(fā)生停滯，停留在G1期。1.5g/L加替沙星處理HCS細(xì)胞后6h內(nèi)，細(xì)胞的線粒體膜電位顯著降低。1.5g/L加替沙星處理HCS細(xì)胞后，caspase-9首先被激活，激活的caspase-9進一步激活caspase-3，表明加替沙星處理后的HCS細(xì)胞可能發(fā)生了線粒體參與介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，但還有待進一步的研究。 本文證實了臨床使用濃度的愛爾卡因和加替沙星對角膜基質(zhì)細(xì)胞具有極強的毒性，因此臨床上對著兩種藥物的使用應(yīng)該更加謹(jǐn)慎，盡量降低其使用濃度和使用頻率。同時作為一種評價眼科藥物毒性的高效簡便的材料，體外培養(yǎng)的HCS細(xì)胞可以為新型眼科藥物的研發(fā)提供體外實驗依據(jù)。
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【學(xué)位授予單位】：中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R96

【參考文獻】

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1 袁小鵬,焦偉華,徐如祥;腫瘤細(xì)胞AO/EB熒光染色法在藥敏試驗中的可行性探討[J];癌癥;1999年03期

2 陳紅斌,陳家祺,陳秉學(xué),楊遠(yuǎn)霞;眼科麻醉的現(xiàn)狀分析與發(fā)展思路[J];國際眼科雜志;2005年05期

3 朱梅紅;韓曉麗;徐國興;;角膜基質(zhì)細(xì)胞研究進展[J];國際眼科縱覽;2007年06期

4 呂增春,邢玉斌;喹諾酮類抗菌藥的分類和進展[J];國外醫(yī)藥(抗生素分冊);2001年02期

5 高立群;;加替沙星致嚴(yán)重失眠兩例[J];華北國防醫(yī)藥;2009年06期

6 呂桂芝,胡穎,張志謙,林仲翔;三磷酸腺苷誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞U937凋亡的電鏡觀察[J];解剖學(xué)報;2000年01期

7 牛洪明,程亞萍,肖克花,門淑香;愛爾卡因表面麻醉致遲發(fā)性過敏反應(yīng)1例[J];臨床眼科雜志;2005年02期

8 蔣國軍,苗智如,陳金文;第四代氟喹諾酮類抗菌藥物的研究進展[J];浙江臨床醫(yī)學(xué);2005年11期

9 陳丕俞;齊學(xué)碩;;淺析喹諾酮類藥物的研究進展[J];黑龍江醫(yī)藥;2013年01期

10 格日勒圖;張玉鳳;偉偉;;應(yīng)用表面麻醉聯(lián)合球結(jié)膜下麻醉行青光眼小梁切除手術(shù)[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2013年01期

本文編號：2375571