發(fā)布時(shí)間：2018-12-11 22:47

【摘要】：絲狀病毒(filoviruses)和尼帕病毒(Nipah Virus, NiV)均屬于危害人類健康和公共安全的高致病病毒。病毒感染人后會(huì)導(dǎo)致出血熱和嚴(yán)重腦炎,其特點(diǎn)為發(fā)病快,致死率高,且現(xiàn)尚無藥物或疫苗。研發(fā)針對上述兩類病毒治療藥物不但可以援助非洲和東南亞疫情多發(fā)地區(qū),而且對我國也是必要的藥物儲(chǔ)備。絲狀病毒包括埃博拉病毒(Ebola virus, EBOV)和馬爾堡病毒(Marburg virus, MARV),可分別引起埃博拉出血熱(Ebola hemorrhagic fever, EHF)和馬爾堡出血熱(Marburg hemorrhagic fever, MHF),其中EHF致命性更強(qiáng)。NiV引起的嚴(yán)重病毒性腦炎和呼吸系統(tǒng)疾病致死率也比較高。由于兩類病毒的高危險(xiǎn)性,其活病毒實(shí)驗(yàn)需要生物安全級(jí)別4級(jí)(Biosafety Level 4, BSL-4)實(shí)驗(yàn)條件,嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)條件限制了其抗病毒藥效學(xué)評價(jià)。絲狀病毒和尼帕病毒屬于囊膜病毒,其囊膜源于宿主細(xì)胞膜,其主要成分是脂質(zhì)和蛋白。囊膜糖蛋白參與病毒侵入宿主細(xì)胞過程：首先囊膜糖蛋白識(shí)別宿主細(xì)胞表面受體并與之結(jié)合,之后囊膜與宿主細(xì)胞融合,進(jìn)而引發(fā)病毒后續(xù)感染過程。絲狀病毒表面包膜糖蛋白(glycoprotein, GP)是介導(dǎo)其侵入的唯一糖蛋白；NiV介導(dǎo)該過程的蛋白有兩個(gè)：G和F蛋白。病毒進(jìn)入細(xì)胞是病毒入侵的第一步,因此阻斷該過程可有效抑制病毒感染。藥物重定位在抗感染藥物研發(fā)中的應(yīng)用被廣泛認(rèn)可,由于已上市藥物安全性和不良反應(yīng)均已明確,且生產(chǎn)工藝成熟,因此以其為物質(zhì)基礎(chǔ)有可能實(shí)現(xiàn)在較短時(shí)間內(nèi)找到可用于臨床的抗絲狀病毒藥物和抗尼帕病毒藥物。假病毒技術(shù)是用于研究高危病毒的經(jīng)典方法。本論文應(yīng)用該技術(shù),制備了以絲狀病毒表面糖蛋白(Glycoprotein, GP)為外殼蛋白包裹HIV-1-luc核心的假病毒,包括扎伊爾型埃博拉病毒(ZEBOV-GP/HIV-1-luc)、蘇丹型埃博拉病毒(SEBOV-GP/HIV-1-luc)和馬爾堡病毒(MARV-GP/HIV-1-luc),以及以尼帕病毒表面糖蛋白F(Nipah virus glycoprotein F, NiV-F)和G (Nipah virus glycoprotein G, NiV-G)為外殼蛋白包裹HIV-1-luc核心的假病毒(NiV-F-G/HIV-1-luc).然后應(yīng)用上述假病毒在BSL-2實(shí)驗(yàn)室對已上市藥物庫進(jìn)行評價(jià),旨在發(fā)現(xiàn)絲狀病毒進(jìn)入抑制劑和尼帕病毒進(jìn)入抑制劑。本論文首先應(yīng)用ZEBOV-GP/HIV-1-luc模型篩選了840個(gè)已上市藥物,結(jié)果顯示,有12個(gè)性激素類藥物可抑制ZEBOV-GP/HIV-1-luc感染,其中IC501μmol·L-1的藥物有3個(gè),分別是枸櫞酸托瑞米芬(IC50:0.19±0.02μmol·L-1)、枸櫞酸他莫昔芬(IC50:0.32±0.01μmol·L-1)和枸櫞酸克羅米芬(IC50:0.53±0.02μmol·L-1)。IC50介于1μmol·L-1～10μmol·L-1的藥物有7個(gè),分別是雌二醇苯甲酸酯(IC50:1.83± 5.69μmol·L-1)、鹽酸雷洛昔芬(IC50:3.48±0.07μmol·L-1)、馬烯雌酮(IC50:4.00±9.94μmol·L-1)、雌二醇(IC50:5.26±9.92μmol·L-1)、炔雌醚(IC50:6.36±5.37 μmol·L-1)、雌激素酮(IC50:6.87±0.03μmol·L-1)及非那雄胺(IC50:9.94±0.45 μmol·L-1)。此外,己烷雌酚(IC50:14.20±0.55μmol·L-1)和醋酸氯地孕酮(IC50: 24.60±0.36μmol·L-1)也有弱活性。進(jìn)一步應(yīng)用SEBOV-GP/HIV-1-luc和MARV-GP/HIV-1-luc評價(jià)上述藥物對其抑制活性,結(jié)果顯示,枸櫞酸托瑞米芬、枸櫞酸他莫昔芬、枸櫞酸克羅米芬、鹽酸雷洛昔芬以及炔雌醚對絲狀病毒SEBOV-GP/HIV-1-luc和MARV-GP/HIV-1-luc也有抑制作用。本論文還評價(jià)了1300個(gè)已上市藥物抗尼帕病毒活性。應(yīng)用NiV-F-G/HIV-1-luc感染高表達(dá)ephrin-B2(EFNB2)的293T細(xì)胞,并在感染前加入受試藥物,通過檢測被感染細(xì)胞中報(bào)告基因表達(dá)水平評價(jià)病毒的感染程度。結(jié)果顯示,1300個(gè)已上市藥物中無尼帕病毒進(jìn)入抑制劑。綜上所述,本論文在BSL-2實(shí)驗(yàn)室條件下應(yīng)用假病毒技術(shù)通過制備絲狀病毒和尼帕病毒,在細(xì)胞水平分別評價(jià)了840個(gè)和1300個(gè)已上市藥物抗絲狀病毒和抗尼帕病毒活性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)了5個(gè)性激素類藥物對絲狀病毒具有廣譜抑制活性,而1300個(gè)已上市藥物中無尼帕病毒進(jìn)入抑制劑。本研究結(jié)果為臨床選擇潛在抗絲狀病毒藥物提供了可供參考的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R978.7

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