【摘要】：近年來Na HS作為H2S的外源性供體,已經(jīng)被運用到多種病理模型中,如心腦肺缺血再灌注模型、糖尿病模型、創(chuàng)傷失血休克模型等。而Na HS本身的毒性作用,嚴(yán)重影響了其在科學(xué)研究中的安全應(yīng)用。肺臟作為Na HS毒性作用主要的靶器官,易受到其毒性的損傷。因此,本試驗將肺臟作為研究對象,選取三個Na HS試驗常用劑量,通過對大鼠肺臟病理組織學(xué)觀察及檢測ROS、MDA、MPO等主要損傷指標(biāo),探究NaHS試驗常用劑量對大鼠肺臟的損傷程度及可能原因。并通過檢測Beclin-1蛋白表達(dá)量及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,確定NaHS致大鼠肺損傷后大鼠肺臟細(xì)胞自噬水平變化。以及使用自噬抑制劑3-MA,初步研究自噬在Na HS致大鼠的肺損傷的作用。以期篩選出肺臟的臨床常用Na HS安全劑量范圍,同時為進(jìn)一步使用Na HS干預(yù)相關(guān)肺臟實驗而提供臨床提供指導(dǎo)和理論基礎(chǔ)。本實驗選取健康的Wistar大鼠150只,隨機(jī)分為7組,空白對照組、Na HSⅠ組(Na HS1 mg/kg,ip)、Na HSⅡ組(Na HS 3 mg/kg,ip)、Na HSⅢ組(NaHS 5 mg/kg,ip)、3-MA+Na HSⅠ組(3-MA 30 mg/kg+Na HS 1 mg/kg,ip)、3-MA+Na HSⅡ組(3-MA 30 mg/kg+Na HS 3 mg/kg,ip)、3-MA+Na HSⅢ組(3-MA 30 mg/kg+Na HS 5 mg/kg,ip)�？瞻讓φ战M為6只,其余各組均為24只。對照組大鼠于實驗開始后2 h全部處死,其余各組大鼠于注射Na HS后2 h、6 h、12 h和24 h時分別處死6只大鼠,取肺臟備用。而后進(jìn)行肺組織病理切片觀察,肺濕干比、ROS、MDA、MPO檢測,以及自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3蛋白檢測和免疫組化觀察。試驗結(jié)果表明:從肺臟病理學(xué)變化可知,自噬抑制前,三個劑量組均發(fā)生肺損傷改變,其病理變化均比對照組嚴(yán)重,且Na HSⅡ組、NaHSⅢ較NaHSⅠ組病變嚴(yán)重。在自噬抑制后,3-MA+Na HSⅠ組肺臟損程度傷較Na HSⅠ組加重,而3-MA+Na HSⅡ組、3-MA+Na HSⅢ組分別較Na HSⅡ組、NaHSⅢ組減輕。從肺臟濕干比結(jié)果可知,自噬抑制前,NaHSⅡ組、Na HSⅢ組在各個時間點均高于對照組(P0.01)。而Na HSⅠ組僅在2 h時顯著升高(P0.05)。自噬抑制后,三種劑量組的在各個時間點,肺W/D比值均高于對照組(P0.01)。肺ROS濃度結(jié)果顯示,無論自噬是否被抑制,各試驗組ROS在2 h、6 h、12 h均高于對照組(P0.05)。肺MDA含量,自噬抑制前,NaHSⅡ組、NaHSⅢ組在各個時間點均顯著升高(P0.01),而Na HSⅠ組僅在2 h出現(xiàn)顯著升高(P0.01)。自噬抑制后,3-MA+Na HSⅡ組、3-MA+Na HSⅢ組在各個時間點均高于對照組(P0.01),而3-MA+Na HSⅠ組僅在2 h、6 h出現(xiàn)顯著升高(P0.01)。肺MPO活性結(jié)果顯示,自噬抑制前,三個劑量組在12 h、24 h均顯著升高(P0.05)。自噬抑制后,3-MA+Na HSⅠ組在2 h、6 h、12 h高于對照組(P0.05),3-MA+Na HSⅡ組、3-MA+Na HSⅢ組在各個時間點均高于對照組(P0.05)。肺Beclin-1蛋白表達(dá)量結(jié)果,3-MA預(yù)處理前,Na HSⅠ組僅在6 h高于對照組(P0.01),而Na HSⅡ組、Na HSⅢ組在各個時間點均高于對照組(P0.01)。3-MA預(yù)處理后,并未明顯抑制各組Beclin-1蛋白表達(dá)量。LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值結(jié)果,3-MA預(yù)處理前,Na HSⅠ組在6 h高于對照組(P0.01),Na HSⅡ組、Na HSⅢ組在各個時間點均高于對照組(P0.01)。3-MA預(yù)處理后,肺LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均低于對照組(P0.05)。肺免疫組化結(jié)果顯示,3-MA抑制了LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的轉(zhuǎn)化,自噬被成功抑制。綜合以上試驗結(jié)果,可得結(jié)論:(1)1 mg/kg、3mg/kg、5 mg/kg的Na HS均對大鼠肺臟產(chǎn)生病理損傷,其損傷主要由Na HS引發(fā)的氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)所引起。(2)自噬在1 mg/kg Na HS所引起的肺損傷中具有保護(hù)作用,而在3 mg/kg、5 mg/kg的NaHS組中可能是加重肺損傷的潛在因素。(3)Na HS干預(yù)肺臟相關(guān)試驗的劑量建議不大于1 mg/kg。
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【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R99

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2370382