【摘要】：目的:探究新型GLP-1/GIP雙受體激動(dòng)劑DA-JC4是否能夠改善STZ誘導(dǎo)的阿爾茲海默大鼠模型的工作以及空間學(xué)習(xí)記憶能力的傷害,是否能緩解tau蛋白的高度磷酸化,是否具有抗凋亡和抗炎癥作用,并進(jìn)一步探討了DA-JC4的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制是否與腦內(nèi)胰島素信號(hào)通路相關(guān)。方法:1.大鼠被隨機(jī)分為四組,1)對(duì)照組:側(cè)腦室注射人工腦脊液+腹腔注射生理鹽水;2)DA-JC4組:側(cè)腦室注射人工腦脊液+腹腔注射DA-JC4;3)STZ組:側(cè)腦室注射STZ+腹腔注射生理鹽水;4)STZ+DA-JC4組:側(cè)腦室注射STZ+腹腔注射DA-JC4。腦部手術(shù)第二天起,每天腹腔注射10nmol/kg DA-JC4,連續(xù)2周,隨后通過Y迷宮和Morris水迷宮分別檢測(cè)各組大鼠的工作工作以及空間學(xué)習(xí)記憶能力。2.采用免疫組織化學(xué)技術(shù),觀察了各組大鼠腦內(nèi)的tau蛋白磷酸化水平以及GFAP陽性星型膠質(zhì)細(xì)胞和IBA1陽性小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量變化。3.采用免疫印記法,檢測(cè)了各組大鼠腦內(nèi)皮層海馬部位的凋亡相關(guān)分子,如BAX和Bcl-2的蛋白表達(dá)水平,以及胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的相關(guān)分子,如IRS1和Akt的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.Y迷宮以及Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,側(cè)腦室注射STZ大鼠的自發(fā)交替行為、空間探索行為等記憶行為評(píng)分顯著降低,治療組給予DAJC4后大鼠的記憶行為評(píng)分明顯得到改善。2.STZ組大鼠腦內(nèi)皮層海馬部位的tau蛋白磷酸化水平明顯高于對(duì)照組。經(jīng)DA-JC4治療后,STZ+DA-JC4組大鼠腦內(nèi)的tau蛋白磷酸化水平明顯低于STZ組。3.STZ組大鼠腦內(nèi)皮層海馬部位的GFAP陽性星型膠質(zhì)細(xì)胞和IBA1陽性小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯高于對(duì)照組。經(jīng)DA-JC4治療后,STZ+DA-JC4組大鼠腦內(nèi)的GFAP陽性星型膠質(zhì)細(xì)胞和IBA1陽性小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯低于STZ組。4.STZ組大鼠腦內(nèi)皮層海馬部位的促凋亡因子BAX與抗凋亡因子Bcl-2的蛋白表達(dá)水平比例明顯高于對(duì)照組。經(jīng)DA-JC4治療后,STZ+DA-JC4組大鼠腦內(nèi)的促凋亡因子BAX與抗凋亡因子Bcl-2的蛋白表達(dá)水平比例明顯低于STZ組。5.STZ組大鼠腦內(nèi)皮層海馬部位的p-IRS1(Ser1101)蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,p-Akt(Ser473)蛋白表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組。經(jīng)DA-JC4治療后,STZ+DA-JC4組大鼠腦內(nèi)的p-IRS1(Ser1101)和p-Akt(Ser473)蛋白表達(dá)水平被部分逆轉(zhuǎn)。結(jié)論:1.DA-JC4能顯著改善STZ誘導(dǎo)的工作以及空間學(xué)習(xí)記憶能力的傷害,部分逆轉(zhuǎn)認(rèn)知下降。2.DA-JC4可明顯降低腦內(nèi)tau蛋白磷酸化水平,避免其進(jìn)一步高度磷酸化,進(jìn)而延緩AD病理特征-神經(jīng)纏結(jié)的形成。3.DA-JC4能減少腦內(nèi)GFAP陽性星型膠質(zhì)細(xì)胞和IBA1陽性小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量,以此減輕STZ誘導(dǎo)的慢性炎癥反應(yīng)。4.DA-JC4通過調(diào)節(jié)促凋亡因子BAX與抗凋亡因子Bcl-2的蛋白表達(dá),抑制STZ誘發(fā)的神經(jīng)元凋亡。5.DA-JC4能下調(diào)p-IRS1蛋白表達(dá)水平,上調(diào)p-Akt蛋白表達(dá)水平,促使腦內(nèi)胰島素信號(hào)通路再次活化。
[Abstract]:Aim: to investigate whether DA-JC4, a novel GLP-1/GIP double receptor agonist, can improve the work of STZ induced Alzheimer rat model, damage the ability of spatial learning and memory, and alleviate the high phosphorylation of tau protein. Whether it has anti-apoptotic and anti-inflammatory effects, and further explore whether the neuroprotective mechanism of DA-JC4 is related to the insulin signaling pathway in the brain. Methods: 1. Rats were randomly divided into four groups: 1) control group: intraperitoneal injection of normal saline by intraperitoneal injection of artificial cerebrospinal fluid (CSF), 2) DA-JC4 group: intraperitoneal injection of DA-JC4; by intraperitoneal injection of artificial cerebrospinal fluid (DA-JC4;) 3) STZ group: intracerebroventricular injection of STZ intraperitoneal injection of normal saline, 4) STZ DA-JC4 group: lateral ventricle injection of STZ intraperitoneal injection of DA-JC4. From the second day of brain operation, 10nmol/kg DA-JC4, was injected intraperitoneally every day for 2 weeks, then the work and spatial learning and memory ability of each group were measured by Y maze and Morris water maze respectively. The changes of tau protein phosphorylation and the number of GFAP positive astrocytes and IBA1 positive microglias in the brain of rats were observed by immunohistochemical technique. 3. The expression levels of apoptosis-related molecules, such as BAX and Bcl-2, and related molecules of insulin signal transduction pathway, such as IRS1 and Akt, were detected by immunoblotting in hippocampus of rats. Results: 1. The results of Y maze and Morris water maze test showed that compared with the control group, the scores of memory behavior, such as spontaneous alternating behavior and spatial exploration behavior, were significantly decreased in rats injected with STZ in lateral ventricle. The memory behavior scores of the rats in the treatment group were significantly improved after DAJC4, and the level of tau protein phosphorylation in the hippocampus of the cerebral cortex in the 2.STZ group was significantly higher than that in the control group. After DA-JC4 treatment, the level of tau protein phosphorylation in the brain of STZ DA-JC4 group was significantly lower than that of STZ group, and the number of GFAP positive astrocytes and IBA1 positive microglia in hippocampus of 3.STZ group was significantly higher than that of control group. After DA-JC4 treatment, The number of GFAP positive astrocytes and IBA1 positive microglia in the brain of rats in STZ DA-JC4 group was significantly lower than that in STZ group. The protein of BAX and Bcl-2 in hippocampus of cerebral cortex in 4.STZ group was significantly lower than that in STZ group. The ratio of expression level was significantly higher than that of control group. After DA-JC4 treatment, The protein expression ratio of pro-apoptotic factor BAX and anti-apoptotic factor Bcl-2 in the brain of STZ DA-JC4 group was significantly lower than that of STZ group. The expression of p-IRS1 (Ser1101) protein in hippocampus of 5.STZ group was significantly higher than that of control group. The expression of p-Akt (Ser473) protein was significantly lower than that of the control group. After DA-JC4 treatment, the expression of p-IRS1 (Ser1101) and p-Akt (Ser473) in the brain of STZ DA-JC4 rats were partially reversed. Conclusion: 1.DA-JC4 can significantly improve the work induced by STZ and the damage of spatial learning and memory ability, and partially reverse cognitive decline. 2.DA-JC4 can significantly reduce the level of tau protein phosphorylation in brain and avoid its further high phosphorylation. 3.DA-JC4 can reduce the number of GFAP positive astrocytes and IBA1 positive microglia in the brain. 4.DA-JC4 inhibits the apoptosis of neurons induced by STZ by regulating the protein expression of BAX and Bcl-2. 5.DA-JC4 can down-regulate the expression of p-IRS1 protein. The expression of p-Akt protein was up-regulated and the insulin signaling pathway was reactivated.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R965

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本文編號(hào)：2365883