【摘要】：目的二甲基甲酰胺（DMF）是一種應(yīng)用極其廣泛的萬(wàn)能有機(jī)溶劑，在各個(gè)制造行業(yè)大量使用，其對(duì)職業(yè)接觸人群健康影響也越來(lái)越大。目前研究較為深入的是DMF對(duì)肝臟的損傷而其對(duì)心臟損害的研究十分罕見，，僅見于少量臨床病例報(bào)告中。課題組在前期的現(xiàn)場(chǎng)衛(wèi)生學(xué)調(diào)查中發(fā)現(xiàn)DMF職業(yè)接觸者有明顯的心電圖異常和心律不齊表現(xiàn)，動(dòng)物染毒實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)DMF會(huì)致使心肌細(xì)胞發(fā)生病變壞死及產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化等改變。為了研究DMF對(duì)心肌產(chǎn)生損害的機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)采用了全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄不同劑量的DMF作用后H9C2心肌細(xì)胞的L-型鈣電流通路變化，研究DMF對(duì)心肌細(xì)胞造成的電生理改變，初步探討DMF對(duì)心肌的毒性作用機(jī)制。 材料和方法實(shí)驗(yàn)用心肌細(xì)胞系購(gòu)于中科院上海細(xì)胞庫(kù)，為正常大鼠心肌細(xì)胞系（H9C2），實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，消化并置于玻片上（細(xì)胞密度約為l105/ml），待2h后細(xì)胞完全貼壁加入含有10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液，在5％CO2、37oC培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。培養(yǎng)24h后用含有不同劑量DMF的新鮮培養(yǎng)液再次培養(yǎng)心肌細(xì)胞24h，用PBS緩沖液清洗三次后置于細(xì)胞外液中用于膜片鉗實(shí)驗(yàn)。保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境在25oC左右，鏡下選擇貼壁良好、邊緣清晰、折光性良好的單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。微電極采用兩步法拉制而成，充灌電極內(nèi)液后阻值在2-5M。微電極經(jīng)電極夾持器與注射器相連，給正壓后浸入電極外液接觸心肌細(xì)胞，使用注射器給予負(fù)壓形成高阻封接，繼續(xù)施加負(fù)壓吸破細(xì)胞膜，形成全細(xì)胞記錄模式。在電壓鉗模式下，記錄低劑量組（140mM DMF染毒組）、高劑量組（220mMDMF染毒組）的L-型鈣電流的變化，并與正常心肌細(xì)胞對(duì)照組進(jìn)行比較。鈣電流的記錄和刺激程序均由PatchMaster軟件完成，輸出信號(hào)經(jīng)HEKA EPC10USB放大器放大。記錄的信號(hào)經(jīng)放大保存后，用配套的FitMaster分析軟件進(jìn)行處理，再經(jīng)相應(yīng)分析模塊得出相應(yīng)的圖形和數(shù)據(jù)。組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，數(shù)據(jù)處理使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件完成。 結(jié)果經(jīng)過(guò)具體分析后發(fā)現(xiàn)三個(gè)實(shí)驗(yàn)組的I-V曲線均在+20mV左右達(dá)到峰值，心肌細(xì)胞的L-型鈣電流的I-V曲線的形狀并沒有明顯改變，表明鈣電流的電壓依賴性沒有改變，但是隨著DMF的作用劑量增大，I-V曲線不斷上移，心肌細(xì)胞L-型鈣電流不斷減小。峰值電流密度比較顯示：對(duì)照組的平均峰值電流密度為-9.50±0.44pA/pF（n=10），低劑量組（140mM DMF）的平均峰值電流密度為-4.43±0.46pA/pF（n=10），峰值電流密度下降了53.37%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。高劑量組（220mM DMF）的平均峰值電流密度為-2.37±0.23pA/pF（n=10），相比較于對(duì)照組下降了75.05%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。高劑量組（220mMDMF）的平均峰值電流密度較低劑量組（140mM DMF）的平均峰值電流密度下降了46.50%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論DMF干預(yù)后，H9C2心肌細(xì)胞發(fā)生了一系列的電生理學(xué)方面的變化，L-型鈣電流峰值平均電流密度隨著DMF作用劑量的增加而降低呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系，并提示DMF引起的心電圖異常和心律不齊等改變可能與其以電壓依賴方式抑制了心肌細(xì)胞膜上的L-型鈣離子通道電流，使鈣離子內(nèi)流減少有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 于耀清,陳軍;電壓門控性鉀、鈣、鈉離子通道的結(jié)構(gòu)及分類[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2005年05期

2 段建紅,楊瑞華,胡三覺;烏頭堿對(duì)受損背根節(jié)神經(jīng)元自發(fā)放電的作用[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年13期

3 賴仞,查宏光,張?jiān)?動(dòng)物離子通道毒素與藥物開發(fā)[J];動(dòng)物學(xué)研究;2000年06期

4 盧樹紅;;二甲基甲酰胺的生產(chǎn)方法和發(fā)展前景[J];廣東化工;2008年06期

5 陳瑛;蘇瑞斌;;氯離子通道和藥物靶標(biāo)[J];國(guó)際藥學(xué)研究雜志;2009年06期

6 詹鳳俠;方四新;楊永堅(jiān);劉恒勃;;二甲基甲酰胺對(duì)作業(yè)工人健康影響的調(diào)查研究[J];工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病;2009年03期

7 張朝;翟溯瀾;;心肌細(xì)胞L型鈣離子通道分子結(jié)構(gòu)與疾病[J];河南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年03期

8 王顯鋼;高艷華;趙曉蓮;關(guān)政;苗智;霍鵬程;王淑秋;;膜片鉗技術(shù)對(duì)鈉離子通道與麻醉鎮(zhèn)痛的應(yīng)用探討[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2006年02期

9 馬二寶;楊占成;龔團(tuán)蓮;高原;唐忠有;李樹光;趙東華;;膜片鉗技術(shù)及其在心血管藥理學(xué)中的應(yīng)用[J];內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2006年06期

10 薛全福;王振綱;;鈣離子和細(xì)胞凋亡及藥物調(diào)控[J];中國(guó)全科醫(yī)學(xué);2009年12期

本文編號(hào)：2338950