【摘要】：以阿爾茲海默癥相關(guān)的基因片段rs242557為研究對象,通過NUPACK軟件預(yù)測Toehold(黏性末端)長度對鏈置換反應(yīng)的影響,設(shè)計(jì)具有高特異性的雙鏈核苷酸探針;富G的核苷酸序列首先被掩蔽在WatsonCrick雙鏈結(jié)構(gòu)中,當(dāng)體系加入目標(biāo)基因后,通過引發(fā)鏈置換反應(yīng)解開該雙鏈結(jié)構(gòu),形成的DNA酶可催化氧化魯米諾化學(xué)發(fā)光反應(yīng),最終采用微流控化學(xué)發(fā)光法實(shí)現(xiàn)單核苷酸多態(tài)性(SNP)分析.該方法不僅具有設(shè)計(jì)簡單、免標(biāo)記及檢測通量高等優(yōu)點(diǎn),而且在僅消耗2μL試樣的條件下實(shí)現(xiàn)了單堿基突變的rs242557目標(biāo)基因的SNP分析(區(qū)分因子達(dá)56),正常目標(biāo)基因的檢出限為1.7 nmol/L.
[Abstract]:The rs242557 gene fragment associated with Alzheimer's disease was used to predict the effect of the length of Toehold (viscous end) on the chain replacement reaction by NUPACK software and a highly specific double-stranded nucleotide probe was designed. The G rich nucleotide sequence was firstly masked in the WatsonCrick double strand structure. When the target gene was added to the system, the double strand structure was solved by initiating a chain replacement reaction, and the resulting DNA enzyme could catalyze the oxidation of luminol chemiluminescence. Finally, microfluidic chemiluminescence method was used to analyze single nucleotide polymorphism (SNP) (SNP). This method not only has the advantages of simple design, high detection flux and so on, but also realizes the SNP analysis of rs242557 target gene with single base mutation under the condition of only consuming 2 渭 L sample (the discriminant factor is 56). Detection limit of normal target gene is 1. 7 nmol/L.
【作者單位】： 浙江大學(xué)化學(xué)系微分析系統(tǒng)研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(批準(zhǔn)號:21075110) 浙江省自然科學(xué)基金(批準(zhǔn)號:LY16B050004) 浙大青年教師交叉研究種子基金(批準(zhǔn)號:JCZZ-2013010)資助~~
【分類號】：R914;O657.3

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本文編號：2325613