【摘要】：神經(jīng)毒性是許多藥物、新藥先導(dǎo)化合物、環(huán)境化合物、農(nóng)藥等常見的毒副作用,需要在藥物早期篩選和臨床前安全性評價中進行評估。傳統(tǒng)的神經(jīng)毒性評價采用體內(nèi)動物實驗,其缺點是需要使用大量的實驗動物,實驗周期長、費用高且結(jié)果判斷主觀性強。隨著近年來各種體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展,可以實現(xiàn)從細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能改變的多參數(shù)終點篩選和評價藥物或化合物引起的神經(jīng)毒性,其優(yōu)勢在于可實現(xiàn)高通量高內(nèi)涵篩選,并從作用機制上解釋和評價藥物的神經(jīng)毒性作用。然而,單一的體外替代方法和檢測終點不能涵蓋所有的神經(jīng)毒性靶點,因此需要建立針對各類藥物或化合物的神經(jīng)毒性評價方法�；谏鲜�,本研究首次體外培養(yǎng)大鼠原代神經(jīng)細(xì)胞評價減毒活疫苗的神經(jīng)毒力。首次體外培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞及其分化細(xì)胞用于篩選藥物的神經(jīng)毒性。減毒活疫苗體外神經(jīng)毒力評價的實驗方法:選用1-3日齡新生SD大鼠,體外無菌條件下獲取大腦實質(zhì),培養(yǎng)穩(wěn)定的原代神經(jīng)細(xì)胞混合培養(yǎng)體系,Anti-MAP2多克隆抗體鑒定神經(jīng)元、Anti-GFAP單克隆抗體鑒定神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。評價麻疹減毒活疫苗、腮腺炎減毒活疫苗和吸附無細(xì)胞百白破火活脊髓灰質(zhì)炎和b型流感嗜血桿菌聯(lián)合疫苗(以下簡稱聯(lián)合疫苗)對神經(jīng)細(xì)胞的神經(jīng)毒力作用,評價終點包括CCK8細(xì)胞增殖毒性、細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變、神經(jīng)細(xì)胞免疫相關(guān)因子TNFα、IL-1β、IL-6濃度變化。結(jié)果:麻疹疫苗和腮腺炎疫苗均未見顯著的CCK8細(xì)胞毒性、細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變和細(xì)胞因子的改變,聯(lián)合疫苗可見顯著的CCK8細(xì)胞毒性,細(xì)胞胞體變形、核漿比增大,以及TNFα、IL-1β細(xì)胞因子的顯著升高。體外評價結(jié)果與猴體神經(jīng)毒力的組織病理學(xué)評價結(jié)果和疫苗的不良反應(yīng)報道相一致。。大鼠神經(jīng)干細(xì)胞及分化細(xì)胞用于評價藥物的神經(jīng)毒性,實驗方法:獲取孕14天左右SD大鼠胎鼠腦組織于SD大鼠神經(jīng)干細(xì)胞完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)形成神經(jīng)球,經(jīng)傳代后得到穩(wěn)定的第二代神經(jīng)球。高通量高內(nèi)涵評價11種具有神經(jīng)毒性和發(fā)育神經(jīng)毒性的藥物或化合物對神經(jīng)球生長的毒性作用、神經(jīng)干細(xì)胞EdU增殖毒性、神經(jīng)干細(xì)胞分化神經(jīng)元的神經(jīng)突生長毒性以及影響神經(jīng)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞毒性。結(jié)果:順鉑、氧化鐵納米粒子、丙戊酸鈉、苯妥英鈉和乙醇可引起神經(jīng)球生長抑制;長春新堿、丙泊酚、丙烯酰胺和氧化鐵納米粒子可引起神經(jīng)球解離細(xì)胞破碎;9-順式視黃酸和瑞芬太尼無神經(jīng)球毒性作用。長春新堿、順鉑、瑞芬太尼、氧化鐵納米粒子、丙泊酚、丙戊酸鈉、苯妥英鈉、丙烯酰胺、乙醇均顯示EdU神經(jīng)干細(xì)胞增殖毒性作用。順鉑、氧化鐵納米粒子、丙泊酚、丙烯酰胺和9-順式視黃酸表現(xiàn)為促進神經(jīng)突生長;瑞芬太尼和苯妥英鈉具有抑制神經(jīng)突生長趨勢。順鉑、瑞芬太尼、氧化鐵納米粒子、丙泊酚、丙戊酸鈉、苯妥英鈉、丙烯酰胺、乙醇可影響神經(jīng)干細(xì)胞的定向分化,其中瑞芬太尼主要影響星形膠質(zhì)細(xì)胞的分化,乙醇對星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的分化均有影響,其余主要表現(xiàn)為神經(jīng)元分化毒性;9-順式視黃酸無神經(jīng)干細(xì)胞分化毒性作用。結(jié)論:本課題是在藥物非臨床安全性評價階段開展的體外替代方法研究,首次應(yīng)用大鼠原代神經(jīng)細(xì)胞評價了減毒活疫苗以及多種抗腫瘤藥物、麻醉劑等,設(shè)定多種檢測終點綜合評價其產(chǎn)生的神經(jīng)毒力和神經(jīng)毒性作用。以期為國內(nèi)外藥物審評機構(gòu)推進神經(jīng)毒性體外替代實驗的標(biāo)準(zhǔn)化和法規(guī)化提供數(shù)據(jù),為我國新藥神經(jīng)毒性臨床前安全性評價新方法和新技術(shù)的建立提供支持。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R96

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本文編號：2301399