【摘要】：目的：建立PITN和PISN大鼠模型，在此模型的基礎(chǔ)上動(dòng)態(tài)觀察自擬復(fù)方川青合劑的鎮(zhèn)痛效應(yīng)；檢測給藥后1小時(shí)PITN各組大鼠三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)Tac1、POMC、ORL1、nNOS、TNF-а基因的表達(dá)差異，并觀察SP和β-EP在PITN及PISN模型腦脊液中的含量以及紋狀體細(xì)胞外液興奮性谷氨酸水平的變化情況。探討川青合劑的鎮(zhèn)痛機(jī)制，為臨床新藥研發(fā)提供與臨床吻合性好的動(dòng)物模型和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：將適應(yīng)性刺激篩選合格的動(dòng)物分為以下幾組：操作對照組、PITN及PISN模型組，模型以赤蘚紅B靜脈注射加激光照射方法誘發(fā)。模型組再分為川青合劑高劑量組（70mg kg-1）、川青合劑低劑量組（35mg kg-1）和加巴噴丁組（100mg kg-1），各組n=6，以Von Frey hairs評價(jià)大鼠機(jī)械痛閾值，記錄投藥前（0min）、投藥后30、60、90、120、180、240、300min時(shí)的機(jī)械痛閾值；以熒光定量PCR技術(shù)檢測PITN動(dòng)物三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)Tac1、POMC、ORL1、nNOS、TNF-а基因mRNA表達(dá)水平；采用腦內(nèi)微透析方法采集PITN和PISN動(dòng)物腦紋狀體細(xì)胞外液；以高效液相-熒光法檢測其中興奮性氨基酸（Glu）的水平；采用放射免疫法檢測PITN和PISN腦脊液中SP和β-EP的含量。 結(jié)果：采用光化學(xué)損傷方法對適應(yīng)性刺激后符合要求的大鼠進(jìn)行TN造模，通過第7、8、9連續(xù)三天機(jī)械痛閾值的測評，將機(jī)械痛閾平均值≤4g視為模型成功，模型成功率為63%；PITN模型大鼠痛閾值由術(shù)前26g降低為術(shù)后1.60±1.74g（P0.01）；造模后第7-60天內(nèi)動(dòng)態(tài)觀察顯示其機(jī)械痛閾值，未見明顯恢復(fù)跡象。模型組與操作對照組比較三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)Tac1mRNA表達(dá)量明顯上調(diào)（P0.05），POMC mRNA表達(dá)量有下調(diào)趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，ORL1、nNOS、TNF-а在各組間沒有明顯差異；放免檢測腦脊液的結(jié)果中SP的水平升高，β-EP的水平降低；紋狀體細(xì)胞外液中Glu含量顯著上升（P0.05）；川青合劑使其疼痛行為學(xué)指標(biāo)明顯改善（P0.05）；Tac1mRNA表達(dá)量下調(diào)（P0.05）、SP含量降低、Glu水平降低（P0.05）、POMC表達(dá)量上調(diào)、β-EP含量上升。操作對照組大鼠術(shù)前和術(shù)后各指標(biāo)無明顯變化。 采用光化學(xué)損傷方法對適應(yīng)性刺激后符合要求的大鼠進(jìn)行SN造模。通過第7、8、9連續(xù)三天機(jī)械痛閾值和冷痛閾值的測評，將機(jī)械痛閾平均值≤10g的SN手術(shù)組的動(dòng)物視為造模成功，模型成功率70%。PISN模型大鼠的機(jī)械痛閾值由術(shù)前60g降低到術(shù)后5.66±2.19g（P＜0.01）；冷痛閾值由0.38±0.49上升到2.39±0.42（P＜0.01），對成模的大鼠術(shù)后第7-43天動(dòng)態(tài)監(jiān)測其機(jī)械痛閾值和冷痛閾值，未見明顯恢復(fù)跡象。放免檢測腦脊液的結(jié)果中SP的水平升高，β-EP的水平降低；紋狀體細(xì)胞外液中Glu含量顯著上升（P0.05）；川青合劑使其疼痛行為學(xué)指標(biāo)明顯改善（P0.05）、SP含量降低、Glu水平降低（P0.05）、β-EP含量上升。操作對照組大鼠術(shù)前和術(shù)后各指標(biāo)無顯著變化。 結(jié)論：PITN和PISN模型較好的模擬了臨床的發(fā)病癥狀與部分病理生理機(jī)制，且模型穩(wěn)定性好、成活率高、易重復(fù)，，為神經(jīng)源性疼痛的基礎(chǔ)研究提供可靠的動(dòng)物模型；自擬川青合劑復(fù)方可明顯緩解疼痛行為學(xué)，其對神經(jīng)源性疼痛模型的鎮(zhèn)痛效應(yīng)可能與紋狀體細(xì)胞外液Glu含量的降低、三叉神經(jīng)節(jié)內(nèi)Tac1mRNA的降低、POMCmRNA的升高、腦脊液中SP的降低、β-EP的上升有關(guān)，提示上述物質(zhì)可能為該鎮(zhèn)痛藥物的鎮(zhèn)痛作用靶點(diǎn)，為臨床鎮(zhèn)痛藥物的研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R964

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2299704