【摘要】：第一章同軸靜電噴霧技術(shù)制備一線抗結(jié)核藥物殼核結(jié)構(gòu)微球及體外釋放研究 目的 探討殼核結(jié)構(gòu)微球的制備條件,制備一線抗結(jié)核藥物殼核結(jié)構(gòu)微球,觀察其體外釋放情況。 方法 PLGA和PLLA作為載體材料,利用同軸靜電噴霧法制備載體濃度為5%,7.5%,10%,12.5%的空白微球(內(nèi)泵流量：1.5ml/h,外泵流量：1.5ml/h,電壓：9.5-10.0KV)。利用共聚焦掃描顯微鏡、掃描電鏡觀察微球的內(nèi)部結(jié)構(gòu)及表征,獲取制備殼核結(jié)構(gòu)微球的最佳制備參數(shù)。根據(jù)上述制備參數(shù)及一線結(jié)核藥物理化性質(zhì)分組：A組：空白殼核微球；B組：異煙肼、鹽酸乙胺丁醇(外殼),利福平、吡嗪酰胺(內(nèi)核)；C組：異煙肼、鹽酸乙胺丁醇(內(nèi)核),利福平、吡嗪酰胺(外殼)制備各組微球。載藥微球進(jìn)行體外釋放實(shí)驗(yàn),利用LC-MS/MS檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)藥物濃度。 結(jié)果 (1)最佳PLGA及PLLA濃度：12.5%濃度制備微球出現(xiàn)紡絲現(xiàn)象；5%,7.5%,10%濃度組激光共聚焦掃描顯微鏡可以觀察到微球呈現(xiàn)殼核結(jié)構(gòu)。掃描電鏡檢查,5%濃度組微球呈現(xiàn)餅狀,7.5%濃度組微球出現(xiàn)表面褶皺,10%濃度組微球表面光滑； (2)微球粒徑：A組微球直徑為18.07±1.174μm,B組微球直徑為18.09±0.800μm,C組微球直徑為18.17±0.903μm； (3)體外釋放：B組,與異煙肼和鹽酸乙胺丁醇對(duì)比,利福平、吡嗪酰胺釋放緩慢,存在明顯差異(P0.05)；C組四種一線結(jié)核藥物呈現(xiàn)同步釋放。 結(jié)論 (1)同軸靜電噴霧法制備殼核結(jié)構(gòu)微球最佳載體材料濃度為10%： (2)水溶性藥物(異煙肼、鹽酸乙胺丁醇)包裹在核內(nèi),脂溶性藥物(利福平、吡嗪酰胺)包裹在殼內(nèi),四種藥物可以達(dá)到同步釋放。 第二部分：殼核結(jié)構(gòu)載藥微球?qū)D大鼠BMSCs生物學(xué)行為的影響 目的 利用SD大鼠BMSCs進(jìn)行體外生物安全性評(píng)估,探討制備的載藥微球是否對(duì)BMSCs產(chǎn)生影響。 方法 雄性SD大鼠(250-300g)脛骨中分離BMSCs,進(jìn)行傳代培養(yǎng)至P3代,并進(jìn)行鑒定。分為對(duì)照組,空白微球組及載藥微球組,觀察微球?qū)MSCs生長(zhǎng)曲線,細(xì)胞活性,成骨誘導(dǎo)能力,遷移能力的影響。 結(jié)果 (1) BMSCs鑒定：88.5%處于細(xì)胞周期G0/G1期,6.02%處于細(xì)胞周期G2/M期,5.53%處于細(xì)胞S期；BMSCs陽(yáng)性表達(dá)CD44,CD90的比例分別為99.34%,98.23%; CD34, CD45呈陰性表達(dá),陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞分別僅為1.47%,1.56%； (2) BMSCs生長(zhǎng)曲線,細(xì)胞活性,成骨能力,遷移能力：各組細(xì)胞均呈“S”型生長(zhǎng)(P0.05); MTT檢測(cè),各組細(xì)胞在3,6,9天OD值無明顯差異(P0.05)；經(jīng)成骨誘導(dǎo)2周,各實(shí)驗(yàn)組均出現(xiàn)明顯的鈣結(jié)節(jié),無明顯差異(P0.05)。 結(jié)論 制備的一線抗結(jié)核藥物殼核結(jié)構(gòu)微球?qū)MSCs的體外生長(zhǎng)及成骨、遷移能力無影響,生物相容性好。 第三章微球局部植入對(duì)SD大鼠骨組織修復(fù)的影響研究及藥物的分布情況 目的 臨床上骨關(guān)節(jié)結(jié)核病灶清除后,進(jìn)行局部的自體或異體骨移植,重建解剖結(jié)構(gòu)。本研究建立骨缺損模型進(jìn)行模擬,局部植入制備的微球,探討其是否影響骨組織修復(fù)及其藥物的分布情況。 方法 SD大鼠脛骨中上段截取2mm長(zhǎng)度骨質(zhì),液氮滅活后回植,建立骨缺損模型。建模動(dòng)物隨機(jī)分為正常組,假手術(shù)組,空白微球組,載藥微球組。2,4,6周隨機(jī)選取動(dòng)物進(jìn)行影像學(xué),HE染色,B-ALP, TRAP-5b檢查觀察骨組織修復(fù)情況；檢測(cè)肝腎功能判斷新劑型微球肝腎毒性；檢測(cè)局部骨組織、肌肉及外周肝臟腎臟內(nèi)結(jié)核藥物的濃度,判斷藥物在動(dòng)物體內(nèi)的分布情況。 結(jié)果 (1)骨組織修復(fù)情況：與假手術(shù)組對(duì)比,空白微球組,載藥微球組在2,4,6周行X片檢查未見明顯骨缺損愈合延遲或者不愈合；組織切片中觀察截骨端變化情況,2周出現(xiàn)骨膜增生,4周缺損部位出現(xiàn)新生骨質(zhì)并向?qū)?cè)生長(zhǎng),6周骨缺損部位形成明顯的骨性連接；手術(shù)干預(yù)的動(dòng)物B-ALP, TRAP-5b較正常動(dòng)物明顯增高(P0.05),各組建模動(dòng)物各時(shí)間點(diǎn)未見明顯差異(P0.05)。 (2)肝腎毒性：與正常動(dòng)物對(duì)比,假手術(shù)組,空白微球組,載藥微球組動(dòng)物肝腎功能指標(biāo)未見明顯升高(P0.05) (3)藥物分布：肝臟、腎臟組織內(nèi)未檢測(cè)到四種結(jié)核藥物,局部骨組織和肌肉組織內(nèi),2,4,6周均可檢測(cè)到四種結(jié)核藥物,并局部濃度高于各結(jié)核藥物MIC (P0.05)。 結(jié)論 (1)局部植入殼核結(jié)構(gòu)載藥微球?qū)墙M織修復(fù)無抑制作用,生物安全性好。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R943

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2298770