【摘要】：目的：探討地爾硫卓(Diltiazem,Dil)對血管緊張素Ⅱ (Ang-Ⅱ)損傷的人臍靜脈內皮細胞的保護作用及其可能的機制。 方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs),用10-6M的Ang-II作為損傷因子模擬體外損傷模型,以氯沙坦(Losartan,LT)為陽性藥物對照,觀察Dil對Ang-Ⅱ損傷的HUVECs的保護作用及其保護作用是否與GHSRIa受體有關。細胞分組：(1)正常對照組；(2) Ang-Ⅱ (10-8M、10-7M、10-6M、10-5M)損傷組；(3) Dil (10-8M、10-7M、10-6M)+Ang-Ⅱ(10-6M)組;(4)[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)+Dil (10-6M)+Ang-Ⅱ(10-6M)組;(5) LT (10-6M)+Ang-Ⅱ (10-6M)組;(6) Dil(10-6M)組;(7)[D-Lys3]-GHRP-6(GHSRIa受體選擇性阻斷劑,25μM)組。細胞貼壁后,隨機分組,加GHSRIa阻斷劑[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)預孵育細胞30min,然后分別加入Dil (10-8M,10-7M、10-6M)及LT(10-6M)處理細胞30min,最后再加入Ang-Ⅱ (10-6M)處理細胞24h。MTT檢測HUVECs田胞活力；流式細胞術檢測HUVECs凋亡率及HUVECs中活性氧水平；比色法檢測細胞培養(yǎng)上清液中NO含量和乳酸脫氫酶(Lactic dehydrogenase,LDH)活性；Real time PCR檢測HUVECs中eNOS和p47phox mRNA表達；Western blot檢測IUVECs中eNOS及p47phox蛋白表達。 結果： 1.各藥物對細胞活力的影響：(1)與對照組相比較,Ang-Ⅱ(10-7M、10-5M)呈濃度依賴性及時間依賴性降低細胞活力(P0.05)；(2)與損傷組(10-6M)相比較,Dil呈濃度依賴性提高細胞活力(P0.05)。 2.各藥物對細胞凋亡率的影響：(1)與對照組相比較,Ang-Ⅱ呈濃度依賴性增加HUVECs田胞凋亡率(P0.05);(2) Dil預處理細胞30min呈濃度依賴性降低細胞凋亡率(P0.05);(3)與Dil (10-6M)+Ang-Ⅱ (106M)組相比較,[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)預孵育細胞30min明顯增加細胞凋亡率(P0.05)。 3.各藥物對細胞產生活性氧的影響：(1)Dil預處理組濃度依賴性降低HUVECs中產生的活性氧(P0.05)；(2)與Dil(10-6M)+Ang-Ⅱ組相比較,[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)預孵育細胞30min,細胞活性氧水平顯著升高(P0.05)。 4.各藥物對細胞上清液中NO和LDH釋放的影響：(1)Dil預處理組顯著增加細胞上清液中NO含量(P0.05),降低LDH活性(P0.05)；(2)與Dil(10-6M)+Ang-Ⅱ組相比較,[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)預孵育細胞30min明顯減少細胞上清液中NO含量,增加LDH活性(P0.05)。 5.各藥物對細胞eNOS mRNA及其蛋白表達的影響：(1)Dil預處理組顯著上調細胞eNOS mRNA及其蛋白表達水平(P0.05)。(2)與Dil (10-6M)+Ang-Ⅱ (10-6M)組相比較,[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)預孵育組明顯下調細胞中eNOS mRNA及其蛋白表達水平(P0.05)。 6.各藥物對細胞p47phox mRNA及其蛋白表達的影響：(1)Dil預處理組下調p47phox mRNA及其蛋白表達水平(P0.05)；(2)與Dil (10-6M)+Ang-Ⅱ (10-6M)組相比較,[D-Lys3]-GHRP-6(25μM)預孵育細胞30min,顯著上調細胞中p47phox mRNA及蛋白表達水平(P0.05)。 結論： (1)Dil對Ang-Ⅱ損傷的HUVECs具有保護作用,其保護作用可能與Dil抗氧化性和上調eNOS、NO有關； (2) GHSRIa阻斷劑預孵育能夠減弱Dil的抗氧化性及下調eNOS、NO； (3)Dil保護Ang-Ⅱ誘導損傷的HUVECs作用可能部分由GHSRIa受體介導。
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【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R96

【參考文獻】

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本文編號：2255203