【摘要】：目的構(gòu)建4種在體內(nèi)以不同速率解離的人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)與人血清白蛋白融合蛋白,探索各種融合蛋白的療效與其解離速率之間的關(guān)系,獲得在藥代動力學(xué)和藥效動力學(xué)之間保持平衡的最佳融合蛋白。方法通過重疊延伸PCR擴增出具有不同多肽接頭的融合蛋白基因,將其克隆到p PIC9載體,電擊轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115,經(jīng)甲醇誘導(dǎo),分泌表達各種融合蛋白,將各種融合蛋白分離純化后進行初步藥代學(xué)和藥效學(xué)研究。結(jié)果融合蛋白與弗林蛋白酶作用后,不可解離的Gly2-GLP-1-GGGGG-HSA融合蛋白未發(fā)生解離,而可解離的融合蛋白Gly2-GLP-1-VTR-HSA為慢解離,Gly2-GLP-1-SARSVRA-HSA為中等解離,Gly2-GLP-1-GRSRVTRSV-HSA為快解離。體外生物學(xué)活性表明,各種融合蛋白均具有促進MIN6細胞胰島素分泌的功能。體內(nèi)藥代學(xué)檢測結(jié)果表明,各種融合蛋白在體內(nèi)的半衰期大小依次為Gly2-GLP-1-GGGGG-HSA、Gly2-GLP-1-VTR-HSA、Gly2-GLP-1-SARSVRA-HSA、Gly2-GLP-1-GRSRVTRSV-HSA。體內(nèi)藥效學(xué)檢測結(jié)果表明,各種融合蛋白均表現(xiàn)出降糖活性,且其活性高低依次為Gly2-GLP-1-VTR-HSA、Gly2-GLP-1-SARSVRA-HSA、Gly2-GLP-1-GRSRVTRSV-HSA、Gly2-GLP-1-GGGGG-HSA。結(jié)論引入蛋白酶切割位點后,GLP-1可在體內(nèi)從融合蛋白中解離,使其恢復(fù)生物學(xué)活性。只有控制融合蛋白在體內(nèi)適當?shù)慕怆x速率才能達到最佳療效,從而在藥代動力學(xué)和藥效動力學(xué)性質(zhì)之間達到平衡。
[Abstract]:Objective to construct four fusion proteins of human glucagon like peptide-1 (GLP-1) and human serum albumin (HSA) at different rates of dissociation in vivo, and to explore the relationship between the efficacy of these fusion proteins and their dissociation rate. The optimal fusion protein was obtained to maintain the balance between pharmacokinetics and pharmacokinetics. Methods the fusion protein gene with different polypeptide junctions was amplified by overlapping extension PCR and cloned into p PIC9 vector. The fusion protein was secreted and expressed by electroporation of Pichia pastoris GS115, induced by methanol. The fusion proteins were isolated and purified for preliminary pharmacokinetic and pharmacodynamic studies. Results after the fusion protein was treated with Flynn protease, there was no dissociation of the insoluble Gly2-GLP-1-GGGGG-HSA fusion protein, while the dissociable fusion protein Gly2-GLP-1-VTR-HSA was Gly2-GLP-1-SARSVRA-HSA, which was the medium dissociated gly2-GLP-1-GRSRVTRSV-HSA. In vitro biological activity showed that all fusion proteins could promote insulin secretion of MIN6 cells. The results of in vivo pharmacokinetics showed that the half-life of the fusion proteins in vivo was Gly2-GLP-1-GGGGG-HSA,Gly2-GLP-1-VTR-HSA,Gly2-GLP-1-SARSVRA-HSA,Gly2-GLP-1-GRSRVTRSV-HSA.. The results of in vivo pharmacodynamics test showed that all fusion proteins showed hypoglycemic activity, and the order of their activity was Gly2-GLP-1-VTR-HSA,Gly2-GLP-1-SARSVRA-HSA,Gly2-GLP-1-GRSRVTRSV-HSA,Gly2-GLP-1-GGGGG-HSA.. Conclusion GLP-1 can be dissociated from the fusion protein in vivo after the introduction of protease cleavage site to restore its biological activity. Only by controlling the proper dissociation rate of the fusion protein in vivo can the optimal efficacy be achieved, thus achieving a balance between pharmacokinetics and pharmacokinetic properties.
【作者單位】： 安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所微生物工程研究室;山西康寶生物制品股份有限公司;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上資助項目(81172968)
【分類號】：R96

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【共引文獻】

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本文編號：2238030