【摘要】：目的研究原矛頭蝮蛇毒(PMV)及其組分作用于血液循環(huán)系統(tǒng)的部分生物學(xué)活性,進(jìn)一步探討其毒性機(jī)制。方法采用Sephadex G-75凝膠層析方法分離不同分子質(zhì)量范圍的蛋白組分FⅠ,FⅡ和FⅢ。貧血小板血漿調(diào)節(jié)富血小板血漿使血小板為3×1011L-1,血小板懸液分別與PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ0.03 g·L-1預(yù)孵育5 min,血小板聚集儀測(cè)定PMV及其組分誘導(dǎo)血小板聚集活性;PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ0.05 g·L-1分別與纖溶酶原0.1 U·L-1預(yù)孵育10 min,采用單一時(shí)間點(diǎn)測(cè)定和酶動(dòng)力學(xué)測(cè)定PMV及其組分酶切發(fā)色底物S-2251的作用;將大鼠血漿與PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ1.0 g·L-1分別孵育5和30 min,測(cè)定凝血酶時(shí)間(TT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶原時(shí)間(PT)和纖維蛋白原(FIB)水平;PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ10,50和250 mg·L-1處理微血管內(nèi)皮細(xì)胞24 h,倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活;PMV,FⅠ,FⅡ和FⅢ0.1 g·L-1與含卵磷脂和不含卵磷脂的豚鼠紅細(xì)胞懸液分別孵育不同時(shí)間,計(jì)算溶血率。結(jié)果與對(duì)照組相比,PMV和高分子質(zhì)量蛋白組分FⅠ(71 ku)誘導(dǎo)血小板聚集率顯著升高〔(61.0±5.8)%和(56.9±5.9)%vs(12.4±4.1)%〕(P0.01)。酶切發(fā)色底物S-2251結(jié)果顯示,PMV與中分子質(zhì)量組分FⅡ(18~37 ku)具有酶切發(fā)色底物的作用(P0.01)。PMV和FⅠ可引起血漿凝固。與對(duì)照組相比,FⅡ組分和低分子質(zhì)量蛋白組分FⅢ(10 ku)明顯使TT,APTT和PT的時(shí)間延長(zhǎng)(P0.01)。PMV,FⅠ及FⅡ?qū)е聝?nèi)皮細(xì)胞解離懸浮,與對(duì)照組相比,細(xì)胞存活率下降,分別為(56.8±3.6)%,(71.6±3.8)%和(58.2±5.5)%。在無(wú)卵磷脂條件下,PMV和FⅡ可緩慢地引起紅細(xì)胞輕度溶血;在卵磷脂參與下,PMV和FⅡ引起豚鼠紅細(xì)胞急劇溶血,與正常對(duì)照組相比,在0.5 min內(nèi)溶血率從(17.7±1.0)%分別升高至(81.0±4.0)%和(81.0±1.0)%(P0.01)。結(jié)論 PMV在體外表現(xiàn)出多方面的血循毒性質(zhì)的活性,不同分子質(zhì)量蛋白組分活性機(jī)制及作用不同。
[Abstract]:OBJECTIVE To study the biological activity of PMV and its components in the blood circulation system and to explore its toxicity mechanism. Methods Sephadex G-75 gel chromatography was used to isolate protein components F I, F II and F III with different molecular weight ranges. Anemic platelet plasma regulated platelet-rich plasma to make platelets 3 *1011. L-1, platelet suspension and PMV, FI, FII and FIII were pre-incubated for 5 min, respectively, and the platelet aggregation activity induced by PMV and its components was measured by platelet aggregation analyzer; PMV, FI, FII and FIII were pre-incubated with plasminogen 0.1 U.L-1 for 10 min, respectively, and the color base of PMV and its components was determined by single time point assay and enzyme kinetics. Rat plasma was incubated with PMV, FI, FII and FIII for 5 and 30 minutes, respectively, to determine thrombin time (TT), activated partial thromboplastin time (APTT), prothrombin time (PT) and fibrinogen (FIB); PMV, FI, FII and FIII for 10, 50 and 250 mg L-1 for 24 hours, respectively. Cell morphology was observed and MTT assay was used to detect cell survival. PMV, FI, FII and FIII 0.1 g L-1 were incubated with lecithin-containing and non-lecithin-containing erythrocyte suspensions of guinea pigs for different periods to calculate the hemolysis rate. Enzyme-digested chromogenic substrate S-2251 showed that PMV and FII (18-37 ku) had the effect of Enzyme-digested chromogenic substrate (P 0.01). PMV and FI could induce plasma coagulation. Compared with the control group, FII and FIII (10 ku) significantly prolonged the time of TT, APTT and P T (P 0.01). MV, FI and FII led to the dissociation and suspension of endothelial cells. Compared with the control group, the cell survival rate decreased (56.8 (+) 3.6)%, (71.6 (+) 3.8)% and (58.2 (+) 5.5)%. In the absence of lecithin, PMV and FII could slowly cause mild hemolysis of erythrocytes; PMV and FII could cause acute hemolysis of erythrocytes in guinea pigs with the participation of lecithin. In 0.5 min, the hemolysis rate increased from (17.7 65507
【作者單位】： 貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室藥理與活性篩選中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81260494)~~
【分類號(hào)】：R996.3

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2226459