【摘要】：目的探討胍丁胺(agmatine,AGM)對脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)誘導小鼠巨噬細胞系RAW264.7氧化應激的抑制作用及其機制。方法 RAW264.7細胞經(jīng)LPS(10μg/m L)刺激發(fā)生氧化應激,同時AGM(1 mmol/L)對其進行干預。分為對照組、LPS組、LPS+AGM組、AGM組。藥物作用24 h,以2,7-二氫二氯熒光素二乙酸酯(2',7'-dichlorofluoresce in diacetate,DCFH-DA)為熒光探針檢測細胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Griess法檢測細胞內(nèi)一氧化氮(NO)水平;Western blot檢測細胞內(nèi)的iNOS蛋白及細胞質(zhì)細胞核內(nèi)Nrf2蛋白表達;RT-PCR檢測Nrf2下游抗氧化酶血紅素氧合酶(heme oxygenase-1,HO-1)mRNA的表達。結果與對照組相比,LPS可顯著增加RAW264.7細胞中ROS、NO以及iNOS蛋白水平,而AGM干預后上述指標含量均明顯降低(P0.05)。AGM干預組中細胞核的Nrf2表達及其下游分子HO-1 mRNA表達水平較LPS單獨刺激組顯著升高,表明Nrf2信號通路在AGM的作用下被活化。結論 AGM可通過活化轉錄因子Nrf2促進抗氧化酶HO-1的表達,進而減輕細胞內(nèi)的氧化應激損傷。
[Abstract]:Objective to investigate the inhibitory effect of agmatine (agmatine,AGM) on oxidative stress induced by lipopolysaccharide (lipopolysaccharides,LPS) in mouse macrophage cell line RAW264.7 and its mechanism. Methods oxidative stress was induced by LPS (10 渭 g / mL) in RAW264.7 cells, and AGM (1 mmol/L) interfered with it. The rats were divided into two groups: control group, lipopolysaccharide group, AGM group. For 24 h, the level of intracellular reactive oxygen species (reactive oxygen species,ROS) was detected with 2H7-dichlorofluoresce in diacetate,DCFH-DA as fluorescence probe. The level of nitric oxide (NO) in cells was detected by Griess method. Western blot was used to detect the level of iNOS protein and fine cytoplasm in cells. The expression of Nrf2 protein in nucleus was detected by RT-PCR. The expression of heme oxygenase (heme oxygenase-1,HO-1) mRNA in the downstream of Nrf2 was detected by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). Results compared with the control group, lipopolysaccharide could significantly increase the levels of ROS,NO and iNOS protein in RAW264.7 cells. The expression of nuclear Nrf2 and its downstream HO-1 mRNA expression in AGM intervention group were significantly higher than those in LPS alone group, indicating that Nrf2 signaling pathway was activated by AGM. Conclusion AGM can promote the expression of antioxidant enzyme HO-1 by activating transcription factor Nrf2, and then alleviate the oxidative stress injury in cells.
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院急診科;第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所第一研究室 創(chuàng)傷、燒傷與復合傷國家重點實驗室;
【基金】：國家重點基礎研究發(fā)展計劃(973計劃,2012CB518102)~~
【分類號】：R965

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