【摘要】：為了克隆巴馬小型豬細胞色素P4503A46基因,建立P4503A46穩(wěn)定表達肝癌細胞株(Hep G2-P4503A46),并探究其藥物代謝活性,通過RT-PCR從肝組織中釣取基因P4503A46,將基因與真核表達載體pc DNA3.1連接并轉染Hep G2細胞,經(jīng)G418篩選10代,獲得穩(wěn)定表達重組細胞株Hep G2-P4503A46,以P4503A特異性代謝底物硝苯地平(NF)探針藥物,將探針藥物與重組細胞在優(yōu)化的細胞濃度、藥物濃度、孵育時間等條件下進行體外孵育,通過高效液相色譜儀檢測其藥物代謝(抑制)動力學參數(shù),并將對照組進行比較分析。結果表明,本研究成功從人Bama小型豬肝組織克隆了P4503A46基因,并通過G418篩選,成功建立了細胞穩(wěn)定表達株,其硝苯地平代謝活性顯著高于陰性對照組(P0.01);因此,成功克隆、并建立了小型豬P4503A46的穩(wěn)定表達細胞株(Hep G2-P4503A46),該細胞株具有顯著的硝苯地平代謝活性。
[Abstract]:In order to clone the cytochrome P4503A46 gene of Bama miniature pig, to establish P4503A46 expressing hepatoma cell line (Hep G2-P4503A46) stably, and to explore its drug metabolism activity, the gene P4503A46 was isolated from liver tissue by RT-PCR, and the gene was ligated with eukaryotic expression vector PC DNA3.1 and transfected into Hep G2 cell. The recombinant cell line Hep G2-P4503A46 was screened by G418 for 10 passages. The recombinant cell line Hep G2-P4503A46 was used as a specific metabolic substrate of P4503A, nifedipine (NF) probe drug was used to optimize the cell concentration and drug concentration. The pharmacokinetic parameters were measured by high performance liquid chromatograph (HPLC) and compared with the control group. The results showed that the P4503A46 gene was cloned successfully from human Bama small pig liver tissue, and the stable expression strain was successfully established by G418 screening. The metabolic activity of nifedipine was significantly higher than that of negative control group (P0.01). The stable expression cell line (Hep G2-P4503A46) of miniature pig P4503A46 was established. The cell line showed significant metabolic activity of nifedipine.
【作者單位】： 瀘州職業(yè)技術學院生物醫(yī)學工程研究所;第三軍醫(yī)大學實驗動物中心;
【基金】：國家“十五”科技攻關計劃重點項目資助課題(2004BA717B23)
【分類號】：R965

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本文編號：2168170