【摘要】：目的探索氨氯地平拮抗氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)損傷大鼠骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC)血管樣結(jié)構(gòu)形成及其作用機(jī)制。方法實驗分為對照組、ox-LDL組(50 mg/L ox-LDL)和氨氯地平組(50 mg/L ox-LDL+0.5μmol/L氨氯地平)。差異貼壁法培養(yǎng)分離EPC,ac-LDL攝取和結(jié)合UEA-1鑒定EPC,Transwell測定細(xì)胞遷移,Matrigel法測血管生成,Western blot和RT-PCR分別檢測內(nèi)皮型一氧化氮合酶(e NOS)的蛋白水平和mRNA表達(dá)情況,DCFH-DA法檢測活性氧(ROS)水平,Griess法測定一氧化氮(NO)含量。結(jié)果 EPC經(jīng)50 mg/L的ox-LDL處理后,細(xì)胞的遷移能力下降近3倍,血管樣結(jié)構(gòu)形成能力明顯下降,用0.5μmol/L氨氯地平干預(yù)可部分恢復(fù)EPC的遷移能力,并顯著恢復(fù)EPC的血管樣結(jié)構(gòu)形成能力(P0.05)。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),ox-LDL下調(diào)EPC e NOS mRNA和蛋白表達(dá)水平,顯著減少NO的含量(P0.01),氨氯地平顯著拮抗ox-LDL的上述作用;EPC經(jīng)50 mg/L的ox-LDL處理后,細(xì)胞內(nèi)ROS含量顯著增加(P0.01),氨氯地平顯著減少胞內(nèi)ROS的水平(P0.05)。結(jié)論氨氯地平對ox-LDL損傷EPC血管樣結(jié)構(gòu)的形成有顯著拮抗作用,其作用與上調(diào)e NOS表達(dá)和降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平有關(guān)。
[Abstract]:Objective to investigate the antagonistic effect of amlodipine on vascular formation of bone marrow derived endothelial progenitor cells (EPC) in rats with oxidative low density lipoprotein (ox-LDL) and its mechanism. Methods the rats were divided into control group (50 mg/L ox-LDL) and amlodipine group (50 mg/L ox-LDL 0.5 渭 mol/L amlodipine). Isolation of EPCA ac-LDL by differential adherent method and identification of EPCA by UEA-1. Western blot and RT-PCR were used to detect the protein level and mRNA expression of endothelial nitric oxide synthase (e NOS). DCFH-DA was used to detect reactive oxygen (ROS) (Ros). The content of nitric oxide (NO) was determined by level Griess method. Results after EPC was treated with 50 mg/L ox-LDL, the migration ability of the cells decreased nearly 3 times, and the ability of angioid structure formation was obviously decreased. 0.5 渭 mol/L amlodipine could partially restore the migration ability of EPC and significantly restore the vascular like structure formation ability of EPC (P0.05). It was found that ox-LDL down-regulated the expression of EPC e NOS mRNA and protein and significantly reduced the content of no (P0.01). Amlodipine significantly antagonized the above effects of ox-LDL on EPC treated with 50 mg/L ox-LDL. Intracellular ROS content was significantly increased (P0.01), amlodipine significantly decreased intracellular ROS level (P0.05). Conclusion Amlodipine has a significant antagonistic effect on the formation of vascular like structure of EPC damaged by ox-LDL, which is related to the up-regulation of e NOS expression and the reduction of intracellular ROS level.
【作者單位】： 南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院;南華大學(xué)心血管疾病研究所動脈硬化學(xué)湖南省重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(81070221) 江蘇省博士后科研資助基金(1302095B) 湖南省衛(wèi)生廳課題(B2013-034,B2011-054)資助
【分類號】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2153428