【摘要】：核小體的賴氨酸側鏈經(jīng)過乙�；饔梅g修飾后在調(diào)節(jié)眾多不同細胞功能中起到非常重要的作用,包括能量和物質(zhì)新陳代謝、蛋白質(zhì)折疊、轉(zhuǎn)錄和翻譯。由組蛋白乙�；负徒M蛋白去乙酰化酶催化分別完成的組蛋白賴氨酸側鏈乙�；腿ヒ阴；膭討B(tài)平衡與表觀遺傳控制相關。組蛋白去乙酰化酶大致可以分為依賴NAD+和依賴鋅離子的幾個亞型Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ。其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ是依賴鋅離子的去乙酰化酶,而子家族Ⅲ(即sirtuins)是依賴NAD+的去乙�；�。組蛋白去乙酰化酶8(HDAC8)是依賴鋅離子的子家族I中的一個成員。由于結構和動力學的特征HDAC8成為這個家族中獨特的一個成員,自2000年發(fā)現(xiàn)HDAC8以來,對于其激活劑研究報道甚少。同時,一些間接的證據(jù)表明HDACs特定亞型的激活在對于促進生理上的代謝過程有著很大的潛在功效。在未來,激活劑在全面探索HDAC8/HDACs的生理學和藥理學作用,以及開發(fā)新型治療代謝衰老和癌癥相關疾病上面有著巨大的應用潛能。本研究進行了一下五個方面的工作:(i)我們設計、合成、純化并且表征了7個新型化合物,并將其與對照物化合物(TM-2-51)同時在HDAC8酶上進行測試,采用含有AMC(即FLUOR DE LYS?-HDAC8)物質(zhì)作為酶活測定的底物和基于HPLC的酶測試系統(tǒng)的方法,定量測量了每個化合物的激活量,以對照物TM-2-51為參照評估化合物的效能;(ii)此外將這7個化合物同樣和對照物以及不含AMC的HDAC8的底物(CH3-CO-FG-K_(ac)-FSW-NH2)進行測試,定量比較了與TM-2-51激活量的差異,從而判斷這些新型激活劑是否具有底物特異性;(iii)隨后,人體宮頸癌細胞核提取物(含細胞核內(nèi)HDAC_s例如HDAC-1 and-2)和AMC底物采用同樣的測試系統(tǒng)進行同種型選擇性測試,來測試這些新型激活劑對于HDACs是否具有選擇性;(iv)為了進一步確認這些化合物的選擇性,我們還采用了不含AMC的人體宮頸癌細胞核底物CH3-CO-RHKAc KAc-CO-NH2)來代替AMC底物,進行另外一輪的酶測試;(v)選擇7個化合物中表現(xiàn)最好的激活劑(即化合物-7)來進一步測試HDAC-8底物的在有激活劑和無激活劑情況下的Km值。我們的化合物在的基于HPLC的酶測試中,無論是使用AMC底物還是不含AMC底物(CH3-CO-FG-K_(ac)-FSW-NH2)的HDAC8的酶測試中,在損害對照物(僅在前面一個底物存在的情況下激活HDAC8)情況下均表現(xiàn)出激活作用,且在人體宮頸癌細胞核提取物的細胞測試結果中表現(xiàn)為HDAC8的選擇性激活劑。然而,在某種程度上來說,對比由Singh等發(fā)現(xiàn)的N-乙酰硫脲系類的激活劑,我們的化合物來說并不是底物特異性,總的來說化合物7是最好的激活劑。本研究以及前期研究為未來探索更多的HDAC8酶選擇性激活劑奠定了良好的基礎,有利于今后通過小分子激活劑來更深入詳盡的探索其分子學和動力學機制。
[Abstract]:The lysine side chain of nucleosome plays an important role in regulating many different cellular functions including energy and substance metabolism protein folding transcription and translation. The dynamic balance of histone lysine side chain acetylation and deacetylation catalyzed by histone acetylase and histone deacetylase is related to epigenetic control. Histone deacetylase can be divided into NAD dependent and zinc dependent subtypes 鈪，

本文編號：2145782