固定化分選酶介導(dǎo)的多肽環(huán)化
本文選題:分選酶 + 固定化酶; 參考:《藥學(xué)學(xué)報》2015年05期
【摘要】:多肽環(huán)化修飾是提高其穩(wěn)定性和生物活性的重要手段之一,本研究建立了含有適于親和色譜純化的6個組氨酸和幾丁質(zhì)結(jié)合域兩個融合標(biāo)簽的分選酶表達(dá)系統(tǒng),純化獲得了目的蛋白;酶促動力學(xué)實驗結(jié)果表明融合標(biāo)簽對其催化活性沒有影響;以N-端含有3個甘氨酸和C-端含有分選酶識別序列的線性肽為底物研究了固定化酶催化線性肽的環(huán)化,該技術(shù)操作簡單,易于酶促反應(yīng)產(chǎn)物的分離純化和固定化酶再利用,可直接用于環(huán)肽類藥物的化學(xué)-酶法合成。
[Abstract]:Polypeptide cyclization is one of the important methods to improve its stability and biological activity. In this study, a separation enzyme expression system containing six fusion labels of histidine and chitin binding domain suitable for purification by affinity chromatography was established. The results of enzymatic kinetic experiments showed that the fusion label had no effect on the catalytic activity of the target protein. The cyclization of linear peptides catalyzed by immobilized enzymes was studied using N- terminal linear peptides containing three glycine and C- terminal enzyme recognition sequences as substrates. The technique was simple, easy to separate and purify the products of enzymatic reactions and to be reused by immobilized enzymes. It can be directly used in the chemical-enzymatic synthesis of cyclopeptide drugs.
【作者單位】: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所天然藥物活性物質(zhì)與功能國家重點(diǎn)實驗室國家衛(wèi)生和計劃生育委員會天然藥物生物合成重點(diǎn)實驗室;
【基金】:國家自然科學(xué)基金資助項目(30772677,81072562) 國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項資助項目(2012ZX09301002) 中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)(2012N06)
【分類號】:R914
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,本文編號:2105050
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