本文選題：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 + 帕羅西汀��； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種常見自身免疫病,其基本病理變化為組織的變質(zhì)、滲出和增生,典型的急性炎癥表現(xiàn)為紅、腫、熱痛和功能障礙。參與炎癥應(yīng)答的細(xì)胞都可稱作炎癥細(xì)胞,其中淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞是免疫炎癥的中心細(xì)胞。早期診斷和治療是防治關(guān)節(jié)損傷的關(guān)鍵。使用緩解病情抗風(fēng)濕藥是目前RA治療的基本策略,但這些藥物都有明顯的不良效應(yīng),且治療的有效率不高,因此深入研究RA發(fā)病機(jī)理、尋找新的治療靶點(diǎn)以及開發(fā)新型有效藥物是RA研究的主要方向。RA發(fā)病初期,多種免疫細(xì)胞包括T、B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等在趨化因子等作用下遷移至滑膜組織,是RA關(guān)節(jié)炎的啟動(dòng)因素。趨化因子受體為G蛋白偶聯(lián)受體(G protein coupled receptor,GPCR),其功能受G蛋白偶聯(lián)受體激酶(G protein coupled receptor kinases,GRKs)的精確調(diào)控。調(diào)節(jié)GRKs功能是否可以減少免疫細(xì)胞向滑膜組織遷移尚不清楚。帕羅西汀(paroxetine)為選擇性GRK2抑制劑,其是否通過(guò)抑制GRK2影響免疫細(xì)胞活化及在滑膜組織中浸潤(rùn)從而抑制關(guān)節(jié)炎癥也未見報(bào)道。目的:探討GRK2在膠原性關(guān)節(jié)炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠免疫細(xì)胞活化和在滑膜組織中浸潤(rùn)的作用及帕羅西汀的作用機(jī)制。方法:以Wistar大鼠建立CIA模型;造模d14左右開始出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎癥,根據(jù)關(guān)節(jié)炎指數(shù)將模型組大鼠隨機(jī)分為溶媒對(duì)照組(CIA-Veh),帕羅西汀(15mg/kg/d)(CIA-Par)和MTX(0.5mg/kg/3d)(CIA-MTX)灌胃給藥組,給藥15天,每3天進(jìn)行整體指標(biāo)評(píng)價(jià)。給藥結(jié)束處死大鼠進(jìn)行踝關(guān)節(jié)病理檢查及評(píng)分;計(jì)算胸腺和脾臟指數(shù);CCK法檢測(cè)脾臟T細(xì)胞活力;ELISA法檢測(cè)血清和滑膜勻漿中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和趨化因子(C-X3-C-基元)配體1(chemokine(C-X3-C motif)ligand 1,CX3CL1)水平;流式細(xì)胞術(shù)分析滑膜組織中T、B、巨噬細(xì)胞含量和外周血T細(xì)胞亞群比例變化;免疫組化法觀察滑膜組織T細(xì)胞浸潤(rùn)情況;Transwell法檢測(cè)T細(xì)胞遷移能力;Lipofectamine 3000系統(tǒng)轉(zhuǎn)染p IRES-EGFP-GRK2和p IRES-EGFP質(zhì)粒至脾臟T細(xì)胞,Western blot和免疫熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染T細(xì)胞中GRK2表達(dá)水平;Western blot法檢測(cè)各給藥組脾臟T細(xì)胞GRK2表達(dá)和MAPK通路分子磷酸化。結(jié)果:1.帕羅西汀對(duì)大鼠CIA整體指標(biāo)的影響在大鼠CIA發(fā)病早期(第一次致炎后14天左右)給予帕羅西汀或MTX治療,各治療組大鼠的全身表現(xiàn)評(píng)分、足爪腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)和關(guān)節(jié)腫脹數(shù)較CIA模型組大鼠顯著下降,給藥組大鼠體重明顯恢復(fù)。2.帕羅西汀對(duì)CIA大鼠踝關(guān)節(jié)病理改變的影響踝關(guān)節(jié)病理檢查發(fā)現(xiàn),CIA大鼠的關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞增生明顯,并有較多的免疫細(xì)胞浸潤(rùn),同時(shí)還能觀察到明顯的血管翳形成和血管擴(kuò)張;帕羅西汀和MTX治療組大鼠的關(guān)節(jié)病理得到明顯改善。3.帕羅西汀對(duì)CIA大鼠胸腺和脾臟指數(shù)的影響CIA大鼠的胸腺和脾臟較正常組大鼠明顯腫大,指數(shù)明顯升高;帕羅西汀和MTX給藥可顯著降低CIA大鼠胸腺和脾臟指數(shù)。4.帕羅西汀對(duì)CIA大鼠血清和滑膜組織細(xì)胞因子和趨化因子水平的影響CIA大鼠血清和滑膜勻漿中TNF-α、IL-1β和CX3CL1表達(dá)水平明顯升高,帕羅西汀和MTX給藥可顯著降低CIA大鼠血清和滑膜中上述因子水平。5.帕羅西汀對(duì)免疫細(xì)胞在滑膜組織中浸潤(rùn)的影響在CIA大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜組織單細(xì)胞消化液中可檢測(cè)到大量CD4+輔助性T細(xì)胞(helper T,Th)、CD8+殺傷性T細(xì)胞(cytotoxic T cell,Tc)、CD45R+B細(xì)胞、CD11b+巨噬細(xì)胞;帕羅西汀和MTX治療可顯著減少Th和Tc細(xì)胞浸潤(rùn)。MTX可抑制B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的滑膜組織浸潤(rùn),帕羅西汀對(duì)B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞遷移沒有明顯影響。免疫組化結(jié)果顯示,CIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜中有較多的T細(xì)胞浸潤(rùn),帕羅西汀和MTX治療可不同程度減少滑膜組織中的T細(xì)胞數(shù)量。6.帕羅西汀對(duì)T細(xì)胞活力和活化的影響CIA大鼠外周血CD3+CD4+輔助性T細(xì)胞(helper T,Th)、CD4+CD25+Foxp3-活化Th細(xì)胞(activated Th,Thact)、CD4+CD44+效應(yīng)Th細(xì)胞(effector Th,Theff)、CD8+CD44+效應(yīng)Tc細(xì)胞(effctor cytotoxic T,Tceff)較正常大鼠明顯增多,而CD4+CD62L+幼稚Th細(xì)胞(na?ve Th,Thnaive)、CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T,Treg)、CD8+CD62L+幼稚殺傷性T細(xì)胞(na?ve cytotoxic T,Tcnaive)比例減少;Th/Tc、Theff/Thnaive、Tceff/Tcnaive比率升高,帕羅西汀和MTX的治療可顯著恢復(fù)T細(xì)胞亞群的平衡。CCK法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),CIA大鼠脾臟T細(xì)胞活力明顯增強(qiáng),帕羅西汀和MTX可有效降低T細(xì)胞活力。7.GRK2在T細(xì)胞遷移中的作用及帕羅西汀的影響Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),脾臟T細(xì)胞GRK2表達(dá)在造模后d14明顯升高,d28達(dá)高峰,緩解期有下降趨勢(shì);帕羅西汀體內(nèi)給藥顯著減少脾臟T細(xì)胞GRK2表達(dá)。體外使用CX3CL1刺激純化得到的脾臟T細(xì)胞,誘導(dǎo)其遷移,同時(shí)給予不同濃度帕羅西汀和MTX,檢測(cè)發(fā)現(xiàn)帕羅西汀和MTX體外給藥顯著抑制T細(xì)胞遷移。T細(xì)胞中高表達(dá)GRK2可以促進(jìn)遷移,帕羅西汀對(duì)GRK2的抑制作用減弱,提示帕羅西汀通過(guò)影響GRK2活力阻止T細(xì)胞遷移。8.帕羅西汀對(duì)脾臟T細(xì)胞MAPK信號(hào)通路的影響CIA脾臟T細(xì)胞p38 MAPK和ERK活性明顯升高,JNK活化不明顯,帕羅西汀可顯著抑制ERK的磷酸化,MTX對(duì)MAPK信號(hào)通路的活性沒有明顯影響。結(jié)論:1.帕羅西汀可有效改善大鼠CIA。2.帕羅西汀減少CIA大鼠T細(xì)胞在滑膜組織中浸潤(rùn),并抑制T細(xì)胞的活化和分化。3.帕羅西汀通過(guò)抑制GRK2表達(dá)及ERK磷酸化而減少T細(xì)胞在滑膜組織中浸潤(rùn)。
[Abstract]:In the early stage of RA , various immune cells , including T , B cells and macrophages , were randomly divided into two groups : T , B cells and macrophages . The levels of TNF - 偽 , IL - 1尾 and CX3CL1 in serum and synoviocytes of CIA rats were significantly lower than those in CIA rats . In vitro , the expression of GRK2 in spleen T cells was significantly increased , and the activity of T cells was decreased significantly . The expression of GRK2 in T cells increased significantly , and the activation and differentiation of T cells were inhibited by the use of CX3CL1 .
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R965

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本文編號(hào)：2096011