本文選題：他克莫司 + 流式細(xì)胞術(shù)��； 參考：《蘇州大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：【目的】觀察他克莫司(Tacrolimus,FK506)在體外對(duì)血小板功能的影響�！痉椒ā渴占�18-25歲、兩周內(nèi)未服用任何藥物的健康志愿者的空腹新鮮靜脈全血,分離得到洗滌血小板及富含血小板血漿(Platelet rich plasma,PRP)。洗滌血小板(3×108/ml)與不同濃度他克莫司或者陰性對(duì)照二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)于37℃孵育2小時(shí),使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)血小板線粒體跨膜電位(Mitochondrial inner transmembrane potential,ΔΨm)變化、血小板活化指標(biāo)P-選擇素(P-selectin)的結(jié)合率。使用Western Blot檢測(cè)他克莫司與正常人洗滌血小板孵育后的血小板促凋亡蛋白Bax,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL的表達(dá)和Caspase-3的活化情況。同時(shí)我們研究了他克莫司對(duì)不同致聚劑誘導(dǎo)的血小板聚集功能的影響,探討他克莫司是否損傷血小板功能,將洗滌血小板與他克莫司(0.06μM)或陰性對(duì)照(DMSO)于37℃孵育2小時(shí)后,洗滌血小板中分別加入膠原(Collagen,5μg/m L)、凝血酶(Thrombin,0.1 U/m L)、瑞斯托霉素(Ristocetin,1.25 mg/m L),1000 rpm剪切力的情況下,使用血小板聚集儀檢測(cè)血小板聚集程度。【結(jié)果】1.臨床限制濃度下的他克莫司不會(huì)誘導(dǎo)血小板凋亡體外研究結(jié)果顯示,與正常陰性對(duì)照相比,臨床限制濃度下的他克莫司不會(huì)誘導(dǎo)血小板ΔΨm去極化,血小板抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL無變化,他克莫司的濃度增高2000倍才檢測(cè)到線粒體膜電位下降及Caspase-3活化裂解。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在臨床限制藥物濃度的情況下,他克莫司不會(huì)誘導(dǎo)血小板發(fā)生凋亡。2.他克莫司對(duì)不同刺激劑誘導(dǎo)的血小板聚集功能的影響,因刺激劑不同而異既往研究證明,他克莫司可影響二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate,ADP)、膠原蛋白、瑞斯托霉素誘導(dǎo)的全血及PRP中血小板的聚集功能,然而,在洗滌血小板中,他克莫司是否影響血小板聚集功能還不清楚。我們通過研究表明,他克莫司能加強(qiáng)膠原誘導(dǎo)的血小板聚集,抑制凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集,對(duì)瑞斯托霉素及血管性血友病因子(Von willebrand factor,VWF)誘導(dǎo)的血小板聚集無明顯作用,提示不同刺激劑對(duì)他克莫司誘導(dǎo)的血小板的聚集功能有不同的影響�！窘Y(jié)論】綜上所述,臨床限制濃度的他克莫司不會(huì)誘導(dǎo)血小板凋亡,他克莫司對(duì)不同刺激劑誘導(dǎo)的血小板聚集功能有不同的影響。本實(shí)驗(yàn)為合理地使用他克莫司提供了更加科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:[objective] to observe the effect of tacrolimus FK506 on platelet function in vitro. [methods] fasting fresh venous whole blood was collected from healthy volunteers aged 18-25 years without taking any drugs within two weeks. Platelet rich plasma-rich plasma (PRP) was isolated from washed platelets. Washed platelets (3 脳 108/ml) were incubated with different concentrations of tacrolimus or dimethyl sulfoxide (Dimethyl sulfoxide DMSO) at 37 鈩，

本文編號(hào)：2056935