本文選題：TT- + 干擾素α��； 參考：《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》2017年06期

【摘要】：目的:評估干擾素α(IFN-α)和TT-1(一種蜂毒肽的類似物)聯(lián)合用藥的抗腫瘤效果,并初步研究聯(lián)合用藥的抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)機制。創(chuàng)新點:為了增強蜂毒肽的抗腫瘤效果,本課題組在其基礎(chǔ)上進行改造,合成了一種新的化合物TT-1。該研究第一次將蜂毒肽類似物和免疫細胞因子IFN-α聯(lián)合使用,并通過實驗證實聯(lián)合用藥可以通過激活免疫調(diào)節(jié)來增強TT-1的抗腫瘤效果。方法:首先通過MTT實驗驗證TT-1對HepG-2/Huh7細胞的增殖抑制作用。接著建立HepG-2/Huh7小鼠移植瘤模型,考察TT-1+IFN-α的體內(nèi)抗腫瘤效果;使用anti-asialo GM-1抗體消除自然殺傷(NK)細胞,驗證NK細胞在聯(lián)合用藥中的關(guān)鍵作用。使用流式細胞術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)驗證TT-1對HepG-2/Huh7細胞MHC I鏈相關(guān)分子A(MICA)表達的影響,并用實時聚合酶聯(lián)反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白質(zhì)印跡(Western blot)對其機制進行探究;通過細胞毒性實驗考察TT-1+IFN-α是否可以增強NK細胞對HepG-2/Huh7細胞的特異性殺傷作用。最后使用免疫組化的方法考察TT-1+IFN-α聯(lián)合用藥對腫瘤組織中MICA和NKG2D的表達量的影響。結(jié)論:MTT實驗表明TT-1可以在體外有效地抑制HepG-2/Huh7細胞的增殖。小鼠移植瘤模型實驗結(jié)果顯示TT-1+IFN-α聯(lián)合用藥比TT-1單獨給藥更能有效地抑制HepG-2/Huh7移植瘤的生長,但是在消除NK細胞之后該效應(yīng)明顯減弱,說明TT-1+IFN-α的抗腫瘤效應(yīng)是通過NK細胞特異性介導的。TT-1不僅可以上調(diào)腫瘤細胞表面MICA的表達量,而且可以減少可溶性MICA的分泌;進一步研究表明,TT-1通過抑制去整合素金屬蛋白酶10(ADAM 10)的表達來阻止MICA從腫瘤細胞表面脫落。細胞毒性實驗表明,TT-1+IFN-α可以顯著增強NK細胞對HepG-2/Huh7細胞的殺傷作用。免疫組化實驗結(jié)果顯示,TT-1+IFN-α聯(lián)合用藥可以明顯增加腫瘤組織中腫瘤細胞表面MICA和NK細胞NKG2D的表達量。綜上所述,TT-1+IFN-α聯(lián)合用藥可以通過增強MICA和NKG2D的相互作用達到顯著的抗腫瘤效果。
[Abstract]:Aim: to evaluate the antitumor effect of interferon 偽 (IFN- 偽) and TT-1 (an analogue of propolis peptide), and to study the mechanism of anti-tumor and immunomodulation. Innovation: in order to enhance the antitumor effect of propolis peptide, a new compound TT-1 was synthesized. In this study, the propolis peptide analogue and IFN- 偽 were used for the first time, and the experimental results showed that the combination therapy could enhance the anti-tumor effect of TT-1 by activating immunomodulation. Methods: MTT assay was used to test the inhibitory effect of TT-1 on the proliferation of HepG-2 / Huh7 cells. Then the transplanted tumor model of HepG-2 / Huh7 mice was established to investigate the anti-tumor effect of TT-1 IFN- 偽 in vivo, and to use anti-asialo GM-1 antibody to eliminate natural killer (NK) cells, to verify the key role of NK cells in combination therapy. Flow cytometry and enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa) were used to examine the effect of TT-1 on the expression of MHC I chain associated molecule A (MICA) in HepG-2 / Huh7 cells. The mechanism of TT-1 was investigated by real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blotting (Western blot). To investigate whether TT-1 IFN- 偽 can enhance the specific cytotoxicity of NK cells to HepG-2 / Huh7 cells by cytotoxicity test. Finally, the effects of TT-1 IFN- 偽 on the expression of MICA and NKG2D in tumor tissues were investigated by immunohistochemical method. Conclusion in vitro, TT-1 can effectively inhibit the proliferation of HepG-2 / Huh7 cells. The results of mouse transplanted tumor model showed that TT-1 IFN- 偽 could inhibit the growth of HepG-2 / Huh7 transplanted tumor more effectively than TT-1 alone, but the effect of TT-1 IFN- 偽 on the growth of HepG-2 / Huh7 transplanted tumor was weakened after NK cells were eliminated. The results showed that the anti-tumor effect of TT-1 IFN- 偽 was mediated by NK cells. TT-1 could not only up-regulate the expression of MICA on tumor cells, but also reduce the secretion of soluble MICA. Further studies have shown that TT-1 inhibits the expression of deintegrin metalloproteinase 10 (ADAM10) to prevent MICA from falling off the surface of tumor cells. Cytotoxicity test showed that TT-1 IFN- 偽 could significantly enhance the cytotoxicity of NK cells to HepG-2 / Huh7 cells. The results of immunohistochemistry showed that TT-1 IFN- 偽 could significantly increase the expression of MICA and NKG2D on tumor cells. In conclusion, TT-1 IFN- 偽 can enhance the interaction between MICA and NKG2D to achieve significant antitumor effect.
【作者單位】： Department
【基金】：supported by the Outstanding Young Talent Foundation Project of Science and Technology Department in Jilin Province(No.20170520018JH),China
【分類號】：R96

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本文編號：2054075