本文選題：秀麗新桿線(xiàn)蟲(chóng) + EYA-1�。� 參考：《吉林大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：第一篇：轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子EYA（eye absent）是一類(lèi)進(jìn)化上相對(duì)保守的基因家族，其C端為編碼271個(gè)氨基酸的EYA結(jié)構(gòu)域。最早發(fā)現(xiàn)EYA是控制果蠅眼部發(fā)育的基因，隨后在線(xiàn)蟲(chóng)、魚(yú)、鳥(niǎo)、鼠、人等動(dòng)物中相繼發(fā)現(xiàn)了一系列EYA基因。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)EYA能夠參與到多重器官的發(fā)育、先天免疫、DNA損傷修復(fù)、血管形成和癌癥轉(zhuǎn)移。在果蠅中，EYA-1的基因突變會(huì)導(dǎo)致復(fù)眼發(fā)育的障礙。在人類(lèi)中，EYA突變還可導(dǎo)致一種原發(fā)疾病稱(chēng)為branchio oto renal (BOR)綜合癥，并且在許多癌癥中都有EYA的過(guò)表達(dá)。線(xiàn)蟲(chóng)體內(nèi)只有一個(gè)EYA蛋白，即EYA-1。為了進(jìn)一步研究EYA蛋白的生物學(xué)功能，我們選擇線(xiàn)蟲(chóng)作為模式生物，用RNA干擾技術(shù)，對(duì)線(xiàn)蟲(chóng)EYA-1蛋白的功能進(jìn)行了研究。 我們首先設(shè)計(jì)出線(xiàn)蟲(chóng)EYA-1的引物，利用合成的引物，將EYA-1基因從線(xiàn)蟲(chóng)的cDNA文庫(kù)中擴(kuò)增出來(lái)，克隆到pGex-2T表達(dá)載體中，最后轉(zhuǎn)化到E.coliBL21codonplus pLysS，得到高效表達(dá)。然后，我們將EYA-1的一段基因序列克隆到pPD129.36質(zhì)粒上，并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌HT115中構(gòu)建出能表達(dá)EYA-1dsRNA的工程菌，將其喂養(yǎng)線(xiàn)蟲(chóng)，經(jīng)Western Blot檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，野生型線(xiàn)蟲(chóng)N2經(jīng)干擾后，EYA-1蛋白的表達(dá)明顯受到了抑制，RNA干擾得到了成功。 我們應(yīng)用RNAi技術(shù)干擾EYA-1蛋白在野生型線(xiàn)蟲(chóng)中的表達(dá)，進(jìn)一步通過(guò)免疫組織化學(xué)染色的研究，證明了EYA-1蛋白主要在線(xiàn)蟲(chóng)的肌肉系統(tǒng)中表達(dá)。此外，我們還發(fā)現(xiàn)，，EYA-1能夠影響線(xiàn)蟲(chóng)的應(yīng)激抵抗能力。在正常的培養(yǎng)條件下，干擾野生型線(xiàn)蟲(chóng)EYA-1的表達(dá)，線(xiàn)蟲(chóng)的壽命沒(méi)有明顯變化。但是在25℃、30℃、35℃的熱激條件下，干擾線(xiàn)蟲(chóng)體內(nèi)EYA-1的表達(dá)，能夠顯著縮短線(xiàn)蟲(chóng)的壽命，并且具有溫度的依賴(lài)性。尤其在35℃時(shí)，干擾EYA-1的表達(dá)能夠縮短線(xiàn)蟲(chóng)壽命達(dá)16.8%。原因在于在熱激的條件下，干擾了線(xiàn)蟲(chóng)體內(nèi)EYA-1的表達(dá)能夠降低熱休克蛋白hsp-16.2的表達(dá)量。在氧化應(yīng)激的條件下，干擾線(xiàn)蟲(chóng)體內(nèi)EYA-1的表達(dá)能夠縮短線(xiàn)蟲(chóng)的壽命達(dá)18.7%，原因在于干擾后，線(xiàn)蟲(chóng)體內(nèi)清除自由基能力的減弱以及超氧化物歧化酶sod-3的下調(diào)。并且，在氧化應(yīng)激的條件下，干擾EYA-1的表達(dá)能夠提高線(xiàn)蟲(chóng)體內(nèi)脂褐素的累積。此外，本研究還以轉(zhuǎn)基因突變株CL4176和AM140為模型，研究了干擾EYA-1的表達(dá)對(duì)于阿爾茨海默癥和亨廷頓舞蹈病的影響，研究表明干擾EYA-1的表達(dá)能夠加速Aβ1 42蛋白質(zhì)毒性和polyQ介導(dǎo)的癱瘓行為的發(fā)生。最后，我們對(duì)EYA-1影響線(xiàn)蟲(chóng)應(yīng)激抵抗能力的機(jī)制進(jìn)行了研究。我們發(fā)現(xiàn)EYA-1影響線(xiàn)蟲(chóng)的應(yīng)激抵抗能力與FOXO轉(zhuǎn)錄因子daf-16有著密切的關(guān)系。在熱應(yīng)激和氧化應(yīng)激的條件下，干擾線(xiàn)蟲(chóng)EYA-1的表達(dá)雖然不能抑制daf-16的核內(nèi)定位，但是對(duì)于daf-16敲除缺陷株的壽命卻沒(méi)有明顯改變，說(shuō)明EYA-1可能是作用在daf-16的下游，并且EYA-1控制線(xiàn)蟲(chóng)的應(yīng)激抵抗能力需要借助轉(zhuǎn)錄因子daf-16的幫助。半定量PCR的結(jié)果顯示，干擾了線(xiàn)蟲(chóng)體內(nèi)EYA-1的表達(dá)能夠下調(diào)daf-16靶基因mRNA的水平，如hsp-12.3和sod-3。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，EYA-1能夠參與到daf-16介導(dǎo)的應(yīng)激抵抗力中，并且作用在daf-16的下游，通過(guò)調(diào)節(jié)應(yīng)激抵抗相關(guān)基因，影響線(xiàn)蟲(chóng)的應(yīng)激抵抗能力，本實(shí)驗(yàn)為研究EYA蛋白的功能提供了新的方向。 第二篇：復(fù)方左卡尼汀注射液是由左卡尼汀和曲美他嗪按照200:1的配比組成，其中左卡尼汀的主要作用是促進(jìn)脂酰-CoA進(jìn)入線(xiàn)粒體，從而促進(jìn)脂肪酸的氧化；曲美他嗪的作用是通過(guò)抑制β-氧化中3-KAT酶的活性，抑制脂肪酸代謝，促進(jìn)葡萄糖氧化，利用有限的氧，產(chǎn)生更多的ATP，增加心臟的收縮功能。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，這兩種作用機(jī)制完全相反的藥物在大鼠和犬的心梗模型上顯示出了非常顯著的抗缺血，縮小心梗面積的協(xié)同作用。 本研究以秀麗新桿線(xiàn)蟲(chóng)作為模式生物，首先研究了0.1%左卡尼汀、0.0005%曲美他嗪，以及兩種單藥的復(fù)方藥物復(fù)方左卡尼汀對(duì)連續(xù)三代線(xiàn)蟲(chóng)壽命以及生殖能力的影響。結(jié)果表明，0.1%左卡尼汀、0.0005%曲美他嗪以及復(fù)方左卡尼汀對(duì)于連續(xù)三代線(xiàn)蟲(chóng)的壽命均無(wú)明顯影響。不同濃度的左卡尼汀、曲美他嗪以及不同濃度配比的復(fù)方左卡尼汀對(duì)于線(xiàn)蟲(chóng)壽命也均無(wú)明顯影響，說(shuō)明該三種藥物對(duì)線(xiàn)蟲(chóng)不具有藥物毒性。在產(chǎn)卵組實(shí)驗(yàn)中，左卡尼汀和曲美他嗪對(duì)于親代、F1代、F2代線(xiàn)蟲(chóng)的生殖能力均有著不同程度的負(fù)面影響。而復(fù)方左卡尼汀對(duì)于線(xiàn)蟲(chóng)的生殖能力不但沒(méi)有體現(xiàn)出負(fù)面影響，反而起到了一定的保護(hù)作用。飲食限制能夠減少線(xiàn)蟲(chóng)的產(chǎn)卵量，并且飲食限制與線(xiàn)蟲(chóng)的脂肪累積有著密不可分的關(guān)系。通過(guò)對(duì)線(xiàn)蟲(chóng)總脂肪進(jìn)行油紅O染色和氣相色譜分析發(fā)現(xiàn)，左卡尼汀和曲美他嗪能夠減少線(xiàn)蟲(chóng)體內(nèi)的脂肪累積和總脂肪酸的含量，而復(fù)方左卡尼汀對(duì)線(xiàn)蟲(chóng)體內(nèi)脂肪累積和總脂肪酸含量無(wú)明顯影響。本研究為復(fù)方左卡尼汀的藥理以及毒理作用提供了理論依據(jù)。
[Abstract]:絎竴綃囷細(xì)杞綍璋冭妭鍥犲瓙EYA(eye absent)鏄竴綾昏繘鍖栦笂鐩稿淇濆畧鐨勫熀鍥犲鏃

本文編號(hào)：2035700