本文選題：高糖 + 內(nèi)皮細(xì)胞　； 參考：《蚌埠醫(yī)學(xué)院》2014年碩士論文

【摘要】：目的：研究高糖對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）中細(xì)胞核因子.κ B(NuclearFactor kappa B，NF-κ B)、細(xì)胞上清液中半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、8羥基脫氧鳥嘌呤（8-OHdG）表達(dá)的影響及Liraglutide的干預(yù)作用，進(jìn)一步探討Liraglutide是否能夠真正有效地保護(hù)損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞，為糖尿病血管并發(fā)癥的防治提供新思路。 方法：體外培養(yǎng)HUVECs，用不同濃度的葡萄糖（分別為：5.5、11.1、25、33.3mmol/L）培養(yǎng)液或高糖(33.3mmol/L)加入不同濃度的“利拉魯肽”（5、10、25、50、100nmol/L）分別孵育細(xì)胞24、48h，用MTT(四甲基偶氮唑鹽)法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞生存率；根據(jù)MTT檢測(cè)結(jié)果將細(xì)胞分為5組，分別是對(duì)照組（5.5mmol/L葡萄糖）、高糖組（33.3mmol/L）、高糖(33.3mmol/L)+低劑量利拉魯肽組（25nmol/L）、高糖(33.3mmol/L)+中劑量利拉魯肽組（50nmol/L）、高糖(33.3mmol/L)+高劑量利拉魯肽組（100nmol/L），分別孵育24、48h后使用RT-PCR測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組HUVECs中NF-κB mRNA的表達(dá)量，酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定(ELISA)法測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞上清液中Caspase-3、8-OHdG的表達(dá)水平。所得數(shù)據(jù)采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果： 1.MTT法檢測(cè)細(xì)胞生存率：與對(duì)照組(葡萄糖終濃度為5.5mmol/L)相比,25、33.3mmol/L葡萄糖濃度組在不同孵育時(shí)間（24、48h）其OD值減少均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)，其中“高糖組”(葡萄糖終濃度為33.3mmol/L)OD值減小最明顯(P0.01),且在一定的高糖濃度(33.3mmol/L)作用下,病變隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸加重(P0.01)；而與“高糖組”相比,加入了不同濃度的“利拉魯肽組”O(jiān)D值均較“高糖組”有所提高,其中25、50、100nmol/L“利拉魯肽組”和“高糖組”比較,各實(shí)驗(yàn)組在不同孵育時(shí)間（24、48h）其OD值升高均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)，尤其“利拉魯肽”濃度為100nmol/L時(shí),作用最強(qiáng)。 2.RT-PCR測(cè)定HUVECs細(xì)胞中NF-κB mRNA的表達(dá)量：對(duì)照組HUVECs中NF-κB mRNA表達(dá)水平較低；高糖組HUVECs中NF-κB mRNA水平較正常環(huán)境顯著增加（P0.01）；經(jīng)不同濃度“利拉魯肽”干預(yù)后，HUVECs中NF-κB的mRNA水平較干預(yù)前顯著減少，，其中利拉魯肽(50、100nmol/1)干預(yù)24、48h的NF-κBmRNA表達(dá)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。利拉魯肽和HUVECs共同孵育24小時(shí)后,隨著利拉魯肽濃度(25、50、100nmol/L)的增加, NF-κB mRNA表達(dá)水平明顯減少(P0.01)。 3.ELISA法測(cè)定HUVECs細(xì)胞上清液中Caspase-3、8-OHdG的表達(dá)水平：與對(duì)照組相比,高糖組HUVECs細(xì)胞Caspase-3、8-OHdG分泌量明顯增加(P0.01),而與高糖組相比,經(jīng)不同濃度“利拉魯肽”作用后,HUVECs細(xì)胞Caspase-3、8-OHdG分泌量明顯降低,并與“利拉魯肽”呈濃度依賴性，其中“高糖+高劑量利拉魯肽”組與“高糖”組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論： 1.高糖加速了體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的損傷,且細(xì)胞損傷的程度具有劑量和時(shí)間依賴性。 2.Liraglutide降低細(xì)胞內(nèi)NF-κ B mRNA的表達(dá),減少HUVECs中氧化應(yīng)激反應(yīng)。 3.Liraglutide降低細(xì)胞上清液中Caspase-3、8-OHdG的表達(dá)，減少高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，同時(shí)減輕內(nèi)皮細(xì)胞的氧化損傷。 4.Liraglutide對(duì)體外高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能與NF-κ B mRNA、Caspase-3、8-OHdG表達(dá)降低相關(guān)。
[Abstract]:Objective: To study the effect of high glucose on nuclear factor kappa B (NuclearFactor kappa B, NF- kappa B) in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), the expression of cysteine proteinase -3 (Caspase-3), 8 hydroxy deoxy guanine (8-OHdG) in cell supernatant and the use of Liraglutide dry preparation, and further explore whether Liraglutide can be effectively protected. Damaged vascular endothelial cells provide new ideas for the prevention and treatment of diabetic vascular complications.
Methods: HUVECs was incubated in vitro, and the cells were incubated with different concentrations of glucose (5.5,11.1,25,33.3mmol/L) or high glucose (33.3mmol/L) with different concentrations of "5,10,25,50100nmol/L" (5,10,25,50100nmol/L), and the cell survival rates were detected by MTT (four methylazazolium salt) method, and the results of MTT detection would be based on the results of MTT detection. The cells were divided into 5 groups: the control group (5.5mmol/L glucose), the high glucose group (33.3mmol/L), the high sugar (33.3mmol/L) + low dose RRRRP group (25nmol/L), the high glucose (33.3mmol/L) + medium dose RRRRP group (50nmol/L), the high glucose (33.3mmol/L) + high dose rrrru group (100nmol/L), and the RT-PCR were incubated with RT-PCR to determine the HUVECs of the experimental group. The expression of NF- kappa B mRNA, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) method was used to determine the expression level of Caspase-3,8-OHdG in the cell supernatant of the experimental groups. The data obtained were analyzed by SPSS19.0 software.
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本文編號(hào)：2015261