本文選題：核仁素 + 帕金森病　； 參考：《毒理學(xué)雜志》2015年01期

【摘要】：目的探索在魚藤酮(Rotenone)染毒的SH-SY5Y細(xì)胞中,核仁素(Nucleolin,NCL)與兩種已知與帕金森病(Parkinson Disease,PD)相關(guān)的基因α-Synuclein和PARK7(Parkinson disease protein 7,又稱DJ-1)編碼的蛋白α-突觸核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)和DJ-1的相互作用。方法采用MTT法檢測(cè)魚藤酮(20、100和500 nmol/L)染毒SH-SY5Y細(xì)胞24 h和3 d后對(duì)細(xì)胞存活率的影響;采用免疫熒光染色法(Immunofluorescent staining,IF)分別染色3種蛋白,在共聚焦顯微鏡下觀察蛋白的亞細(xì)胞定位,分析3種蛋白在空間上的關(guān)系;采用免疫沉淀法(Immunoprecipitation,IP)和免疫蛋白印記(Western Blot,WB)法檢測(cè)染毒前后核仁素分別與DJ-1和α-Synuclein的相互作用。結(jié)果用魚藤酮(20、100和500 nmol/L)染毒SH-SY5Y細(xì)胞24 h后,各個(gè)染毒組細(xì)胞存活率改變與對(duì)照組比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);染毒3 d后20 nmol/L染毒組細(xì)胞存活率改變與對(duì)照組比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而100和500 nmol/L染毒組細(xì)胞存活率改變與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。激光共聚焦分析顯示DJ-1和核仁素分布于SH-SY5Y細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中,而α-Synuclein分布于細(xì)胞質(zhì)中,核仁素與DJ-1和α-Synuclein都有共定位。魚藤酮染毒SH-SY5Y細(xì)胞前后,核仁素分別與DJ-1和α-Synuclein免疫共沉淀后,免疫蛋白印跡結(jié)果顯示核仁素與二者均可形成蛋白復(fù)合體。結(jié)論在SH-SY5Y細(xì)胞中核仁素與DJ-1和α-Synuclein都存在蛋白-蛋白相互作用,染毒魚藤酮后核仁素與DJ-1和α-Synuclein的相互作用并沒有消失,提示核仁素可能是帕金森病相關(guān)蛋白。
[Abstract]:Objective to explore the interaction of 偽 -Synuclein (偽 -Syn-NCLs) and two known genes associated with Parkinson disease (PD), 偽 -Synuclein and PARK7 disease protein 7 (also known as DJ-1) in SH-SY5Y cells exposed to rotenone (Rotenone), and the interaction between 偽 -Synuclein (偽 -Syn-NCL-1) and DJ-1. Methods MTT assay was used to detect the effect of rotenone 2000 and 500nmol / L on cell survival of SH-SY5Y cells exposed to rotenone for 24 h and 3 days, and immunofluorescence staining was used to detect the subcellular localization of SH-SY5Y cells under confocal microscope. The spatial relationship of the three proteins was analyzed, the interaction of nucleolus with DJ-1 and 偽 -Synuclein was detected by immunoprecipitation IPB and Western blotWB. Results SH-SY5Y cells were exposed to rotenone at 20100 and 500 nmol / L for 24 h. There was no significant difference in cell survival rate between each exposure group and the control group, but there was no significant difference in cell survival rate between 20 nmol / L group and control group 3 days after exposure, while 100 and 500 nmol / L groups were fine. The change of cell survival rate was significantly different from that of control group (P 0.05). Laser confocal analysis showed that DJ-1 and nuclein were distributed in the nucleus and cytoplasm of SH-SY5Y, while 偽 -Synuclein was distributed in cytoplasm, and nuclein was colocated with DJ-1 and 偽 -Syin. Before and after rotenone was exposed to SH-SY5Y cells, nucleolus was co-precipitated with DJ-1 and 偽 -Synuclein, and the immunoblotting results showed that nuclein and 偽 -Synuclein could form protein complex. Conclusion the protein-protein interaction exists in SH-SY5Y cells with DJ-1 and 偽 -Synuclein. The interaction between nuclein and DJ-1 and 偽 -Synuclein in SH-SY5Y cells does not disappear after rotenone exposure, suggesting that nuclein may be a Parkinson's disease related protein.
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;北京市疾病預(yù)防控制中心;北京市預(yù)防醫(yī)學(xué)研究中心衛(wèi)生毒理所 北京市食物中毒診斷溯源技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;新疆維吾爾自治區(qū)疾病預(yù)防控制中心;
【分類號(hào)】：R994

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本文編號(hào)：2014201