發(fā)布時間：2018-06-08 12:36

  本文選題：阿霉素 + 免疫脂質(zhì)體��； 參考：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：阿霉素(doxorubicine，DOX)是一種常用的抗腫瘤藥物，屬于周期非特異性藥物，對RNA的抑制作用較強(qiáng)，抗瘤譜較廣。但因其毒副作用較大，長期應(yīng)用會使機(jī)體產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致其療效和應(yīng)用受到極大限制。脂質(zhì)體作為新型的藥物制劑，不僅能降低藥物對機(jī)體的毒副作用，改善藥代動力學(xué)分布還具有緩釋控釋作用，但是其缺乏腫瘤主動靶向性。免疫脂質(zhì)體是近年來新興的一個研究領(lǐng)域，將抗體或配體通過聚合物（如聚乙二醇衍生物）連接在脂質(zhì)體上，利用抗體或配體的特異性靶向作用，與腫瘤細(xì)胞表面上的抗原或者受體結(jié)合，將藥物送達(dá)病灶部位，具有靶向性強(qiáng)、毒副作用小、半衰期長、運(yùn)載量大等優(yōu)點(diǎn)。 大約有20-30%的乳腺癌存在人類表皮生長因子-2(human epidermal growth factorreceptor-2，HER2)過度表達(dá)。HER2基因編碼一種具有酪氨酸激酶活性的蛋白，能增強(qiáng)激酶活性，促進(jìn)細(xì)胞分裂、增生和轉(zhuǎn)化。該基因在成人正常組織中表達(dá)水平較低，在乳腺癌發(fā)生的早期階段具有高表達(dá)現(xiàn)象，提高了乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能。近年來，根據(jù)HER2結(jié)構(gòu)構(gòu)建的具有靶向作用的單克隆抗體曲妥珠單抗(trastuzumab，TMAB)，曲妥珠單抗能與HER2受體結(jié)合，具有較強(qiáng)的親合力和特異性，通過阻斷人體表皮生長因子在HER2上的附著，產(chǎn)生抗腫瘤效應(yīng)，為乳腺癌的治療提供了一種新途徑。曲妥珠單抗（即赫賽�。┮延�1998年10月由美國FDA正式批準(zhǔn)上市。 本文通過薄膜超聲分散法制備阿霉素脂質(zhì)體， DSPE-PEG-NHS與TMAB通過酰胺鍵連接，將阿霉素脂質(zhì)體與TMAB衍生物4℃恒溫震蕩6h，得到阿霉素免疫脂質(zhì)體。阿霉素脂質(zhì)體的包封率為89.85%、載藥率為8.03%、平均電荷在-26mv。確定曲妥珠單抗活性氨基數(shù)目為85個，當(dāng)n（DSPE-PEG-NHS）：n(TMAB)=10：1進(jìn)行反應(yīng)時，測得曲妥珠單抗上參與反應(yīng)氨基數(shù)目為7個。制備三種不同抗體含量的阿霉素免疫脂質(zhì)體，通過葡聚糖凝膠G150分離純化，BCA法測定阿霉素免疫脂質(zhì)體TMAB含量（抗體含量分別為37μg·mg-1、83μg·mg-1、108μg·mg-1），并進(jìn)行體外性質(zhì)研究。以AU565細(xì)胞為HER2陽性細(xì)胞，MDA-MB-231細(xì)胞為HER2陰性細(xì)胞，三種不同抗體含量的阿霉素免疫脂質(zhì)體的激光共聚焦、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)表明：DOX-IML抗體含量83μg·mg-1時，藥物入胞量為86.8%，其入胞能力和細(xì)胞毒性僅次于阿霉素。阿霉素、阿霉素脂質(zhì)體、DOX IML進(jìn)行體外性質(zhì)實(shí)驗(yàn)表明：阿霉素免疫脂質(zhì)體有較強(qiáng)的靶向性，且入胞能力和細(xì)胞毒性均比阿霉素脂質(zhì)體強(qiáng)。本文還研究阿霉素（免疫）脂質(zhì)體粒徑和電位變化：包封阿霉素前后阿霉素脂質(zhì)體的粒徑和電位幾乎無變化，鍵合曲妥珠單抗前后阿霉素免疫脂質(zhì)體的粒徑和電位變化較小。體外釋藥及穩(wěn)定性研究得；阿霉素免疫脂質(zhì)體具有一定的緩釋作用，在12h內(nèi)釋藥量累計(jì)達(dá)40%，，在72h時累積釋藥量幾乎達(dá)到平衡，累積釋藥率達(dá)79%。阿霉素免疫脂質(zhì)體在4℃下，穩(wěn)定性較好。在25℃下，隨著時間延長，粒徑越來越大，顏色由紅色變?yōu)榘导t色，伴有大量沉淀產(chǎn)生。
[Abstract]:Doxorubicine (DOX) is a common antitumor drug, which is a periodic non specific drug. It has a strong inhibitory effect on RNA and a wide spectrum of antitumor. However, because of its toxic and side effects, long term application will cause resistance to the body, and the effect and application are very limited. As a new drug preparation, the liposomes can not only be reduced. The toxic side effects of drugs on the body and the improvement of the pharmacokinetic distribution also have controlled release effect, but they lack active targeting of tumor. Immunliposome is a new research field in recent years. Antibodies or ligands are connected to liposomes through polymers such as polyethylene glycol derivatives, and the specific targeting of antibodies or ligands is used. It combines with the antigen or receptor on the surface of the tumor cells to deliver the drug to the site of the lesion, which has the advantages of strong targeting, small side effects, long half-life and large carrying capacity.
About 20-30% of breast cancer, human epidermal growth factor -2 (human epidermal growth factorreceptor-2, HER2) overexpresses a protein that encodes a tyrosine kinase activity by the.HER2 gene, which can enhance the activity of the kinase and promote cell division, proliferation and transformation. The gene is expressed in normal tissues in adults with low levels and in breast cancer. The early stage of the occurrence has high expression, which improves the metastatic potential of breast cancer cells. In recent years, the monoclonal antibody to trastuzumab (TMAB), a monoclonal antibody against the target by the HER2 structure, can be combined with the HER2 receptor, with strong affinity and specificity, and by blocking the human epidermal growth factor. The attachment on HER2, which produces antitumor effects, provides a new way for the treatment of breast cancer. Trastuzumab (Herceptin) was officially approved by the US FDA in October 1998.
The liposome of doxorubicin was prepared by the thin film ultrasonic dispersion method. DSPE-PEG-NHS and TMAB were connected through the amide bond. The adriamycin liposome and the TMAB derivative oscillated at a constant temperature of 6h to obtain the adriamycin immunliposome. The encapsulation efficiency of adriamycin liposome was 89.85%, the drug loading rate was 8.03%, and the average charge was determined by -26mv. to determine the active amino group of the trastuzumab in -26mv.. The number was 85. When n (DSPE-PEG-NHS):n (TMAB) =10:1 was reacted, the number of amino groups involved in the reaction was 7. Three kinds of adriamycin immunliposomes with different antibody content were prepared and purified by dextran gel G150. The content of adriamycin free liposome TMAB was determined by BCA method (the antibody content was 37 g mg-1,8 respectively. " 3 mu g. Mg-1108 mu g. Mg-1) and study in vitro, with AU565 cells as HER2 positive cells, MDA-MB-231 cells as HER2 negative cells, and three kinds of adriamycin immunliposomes with different antibody content, laser confocal, flow cytometry and cytotoxicity test showed that when the content of DOX-IML antibody was 83 mu g. Mg-1, the drug intake was 86.8%, Its cellular and cytotoxicity were second only to adriamycin. Adriamycin, adriamycin liposome and DOX IML in vitro experiments showed that adriamycin immunliposome had stronger targeting and stronger cellular and cytotoxicity than doxorubicin liposomes. The particle size and potential of adriamycin liposomes were almost unchanged, and the size and potential of doxorubicin immune liposomes were small. The release and stability of adriamycin were studied in vitro. The release effect of adriamycin immunliposome was 40%, and the cumulative release amount was almost reached at 72h. Balance, the cumulative release rate reached 79%. adriamycin immunliposome at 4 C, and the stability was better. At 25 C, the particle size became larger and larger with time, and the color changed from red to dark red with a large amount of precipitation.
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R943

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1995810