天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

活性鹵酚對(duì)心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷的保護(hù)作用及其與HO-1蛋白的相關(guān)性

發(fā)布時(shí)間:2018-06-01 05:44

  本文選題:活性鹵酚 + 心肌細(xì)胞。 參考:《山西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文


【摘要】:研究背景:課題組前期針對(duì)天然來(lái)源的鹵酚進(jìn)行了連續(xù)的系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)優(yōu)化,已經(jīng)設(shè)計(jì)合成了二苯甲酮、二苯甲烷、苯基呋喃-2-基甲酮、苯基噻吩-2-基甲酮四種骨架類(lèi)型的鹵酚化合物,通過(guò)活性的系統(tǒng)篩選,獲得了多個(gè)體外具有高活性的新型鹵酚化合物。其中,對(duì)氧化損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞具有高保護(hù)活性的是2,4’,5’-三羥基-5,2’-二溴二苯甲酮(LM49)、4,5-二羥基2,3-二溴二苯甲酮(LM48)和3,4-二羥基-3’-氯二苯甲酮(LM46),其EC50分別為0.4μmol/L,0.8μmol/L和5.0μmol/L。通過(guò)進(jìn)一步的在體研究,表明這3個(gè)化合物都具有顯著的對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用,且藥理活性最好的的是LM49,其次是LM48和LM46。此外,初步的作用機(jī)制研究已經(jīng)證實(shí)HO-1是鹵酚保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的關(guān)鍵蛋白。目的:明確活性鹵酚LM46、LM48和LM49對(duì)Na_2S_2O_4致H9c2心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷的保護(hù)作用,并探討HO-1蛋白與該保護(hù)作用的相關(guān)性。方法:1.Na_2S_2O_4氧耗法建立H9c2細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型。2.采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞相對(duì)活力,流式細(xì)胞儀檢測(cè)ROS和凋亡,試劑盒檢測(cè)LDH,MDA,SOD,CK,明確活性鹵酚對(duì)缺氧復(fù)氧心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。3.采用Western blot和PCR法檢測(cè)活性鹵酚對(duì)HO-1的蛋白和基因表達(dá)的影響。4.采用特異性阻斷劑Zn PP阻斷HO-1,MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力,活性熒光定量試劑盒檢測(cè)HO-1活性,明確鹵酚化合物對(duì)心肌細(xì)胞保護(hù)作用與關(guān)鍵蛋白HO-1的相關(guān)性。5.探討活性鹵酚對(duì)HO-1的誘導(dǎo)是否依賴于新HO-1mRNA的轉(zhuǎn)錄,在加入活性鹵酚之前加入mRNA合成抑制劑actinomycin D(Act D),western檢測(cè)HO-1蛋白的表達(dá)。探討活性鹵酚對(duì)HO-1的誘導(dǎo)是否依賴于新蛋白的合成,在加入鹵酚化合物之前加入蛋白合成抑制劑cycloheximide(CHX),PCR檢測(cè)HO-1mRNA的表達(dá)。6.熒光光譜法研究鹵酚化合物和HO-1蛋白的相互作用,探討它們的相互作用是否和前面的細(xì)胞保護(hù)活性及對(duì)HO-1基因水平的誘導(dǎo)順序一致。結(jié)果:1.LM46、LM48和LM49在設(shè)定劑量2.5,5和10μmol/L范圍內(nèi)可劑量依賴性地提高細(xì)胞相對(duì)活力,降低細(xì)胞凋亡率和ROS水平,升高SOD活力,抑制LDH、CK、MDA釋放,且對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)活性順序?yàn)長(zhǎng)M49LM48LM46。2.三個(gè)鹵酚化合物均可顯著誘導(dǎo)HO-1蛋白表達(dá)及升高mRNA水平,并呈量效關(guān)系和時(shí)效關(guān)系,而且對(duì)HO-1蛋白和基因表達(dá)的誘導(dǎo)作用順序?yàn)長(zhǎng)M49LM48LM46。3.三個(gè)鹵酚化合物均可劑量依賴性的提高心肌細(xì)胞HO-1的活性,其誘導(dǎo)順序?yàn)長(zhǎng)M49LM48LM46;采用Zn PP阻斷后,給藥組的HO-1活性及細(xì)胞保護(hù)率均顯著降低。4.加入轉(zhuǎn)錄抑制劑Act D后,三個(gè)鹵酚化合物對(duì)HO-1蛋白表達(dá)的誘導(dǎo)均較單獨(dú)給藥顯著降低;加入蛋白合成抑制劑CHX后,三個(gè)鹵酚化合物給藥組的HO-1 mRNA水平均較單獨(dú)給藥組升高。5.三個(gè)鹵酚化合物均能使HO-1的熒光光譜猝滅,猝滅機(jī)制為靜態(tài)猝滅,結(jié)合常數(shù)相差不大。從熱力學(xué)參數(shù)判斷,LM46與HO-1間相互作用力主要為范德華力、氫鍵或質(zhì)子化等作用力;LM48和LM49與HO-1間相互作用力主要為靜電作用和疏水作用力。隨著鹵酚LM48,LM49濃度的增加,同步熒光光譜色氨酸的最大發(fā)射波長(zhǎng)略有紅移,顯示HO-1色氨酸殘基附近的微環(huán)境疏水性降低,極性增強(qiáng)。結(jié)合三維光譜等高線圖,可以推斷在鹵酚化合物存在下HO-1的構(gòu)象發(fā)生了變化。結(jié)論:1.活性鹵酚對(duì)缺氧復(fù)氧損傷的心肌細(xì)胞有明確的保護(hù)作用,該保護(hù)作用與抗氧化應(yīng)激、抑制細(xì)胞凋亡相關(guān),活性順序?yàn)長(zhǎng)M49LM48LM46。2.HO-1是活性鹵酚保護(hù)心肌細(xì)胞的關(guān)鍵蛋白,活性鹵酚可通過(guò)誘導(dǎo)HO-1的基因轉(zhuǎn)錄和翻譯,升高HO-1蛋白表達(dá),提高HO-1活性,從而發(fā)揮對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。3.鹵酚對(duì)HO-1蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)依賴于HO-1基因轉(zhuǎn)錄水平的升高,鹵酚對(duì)HO-1基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控并不依賴于新蛋白的合成。4.通過(guò)熒光光譜法證實(shí)了鹵酚化合物與HO-1蛋白之間存在相互作用。
[Abstract]:The protective effects of active halophenols LM46 , LM48 and LM49 on myocardial ischemia - reperfusion injury in rats were studied . 3 . The induction of HO - 1 protein was dependent on the level of HO - 1 gene transcription , and the regulation of halophenol on HO - 1 gene transcription did not depend on the synthesis of new protein . 4 . The interaction between the halophenol compound and HO - 1 protein was confirmed by fluorescence spectrometry .
【學(xué)位授予單位】:山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類(lèi)號(hào)】:R914;R96

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王藝潤(rùn);方慶;胡濤英;劉穎;;光譜法和分子對(duì)接模擬技術(shù)研究異煙肼對(duì)人血清白蛋白和過(guò)氧化氫酶的特異性結(jié)合及抑制作用(英文)[J];光譜學(xué)與光譜分析;2016年11期

2 江懌雨;王湘利;汪華華;張蕾;王惠;計(jì)亮年;劉海洋;;新型羧酸卟啉鋅(Ⅱ)配合物與人血清蛋白的作用[J];光譜學(xué)與光譜分析;2016年09期

3 曹娟;黃燕;張岐;華玉潔;華明清;龔建波;朱衛(wèi)華;;基于低聚殼聚糖的希夫堿化合物與BSA的相互作用[J];光譜學(xué)與光譜分析;2016年04期

4 吳雨杭;韓忠保;馬嘉澤;何妍;劉麗艷;辛士剛;于湛;;同步熒光光譜法結(jié)合分子對(duì)接研究金雀花堿與牛血清白蛋白間相互作用[J];光譜學(xué)與光譜分析;2016年03期

5 楊子聰;劉伶;;血紅素加氧酶-1與心血管疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J];廣西醫(yī)學(xué);2015年08期

6 王義;馮秀娥;趙雷;李青山;;新型鹵酚化合物3’,4’-二羥基-3-氯二苯甲酮對(duì)大鼠缺血/再灌注心肌的保護(hù)作用[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2012年08期

7 唐艷榮;吳升華;;LXA_4誘導(dǎo)HO-1高表達(dá)對(duì)心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2012年04期

8 李倩;武維恒;李東野;祁春梅;丁以柱;;辛伐他汀在心肌細(xì)胞缺血再灌注中的作用及機(jī)制[J];中華全科醫(yī)學(xué);2011年11期

9 李玉琴;賈寶秀;姚曉軍;冀海偉;郭豐廣;齊永秀;;光譜法與分子模擬對(duì)左旋紫草素和人血白蛋白鍵合作用的研究[J];分析測(cè)試學(xué)報(bào);2009年12期

10 姜赤曉;許小峰;;血紅素加氧酶-1的研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2009年27期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 姜大春;HO-1基因轉(zhuǎn)染對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 高潔;活性鹵酚化合物對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞EA.hy926中HO-1的誘導(dǎo)及其上游信號(hào)通路的調(diào)控作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

2 李曉偉;Intermedin對(duì)缺氧復(fù)氧所致H9c2心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

3 李道金;藥物與蛋白質(zhì)的相互作用研究[D];蘭州大學(xué);2007年

,

本文編號(hào):1963062

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://sikaile.net/yixuelunwen/yiyaoxuelunwen/1963062.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶b46d1***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要?jiǎng)h除請(qǐng)E-mail郵箱bigeng88@qq.com