本文選題：馬丁達(dá)比狗腎上皮細(xì)胞 + 有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體��； 參考：《中國(guó)藥學(xué)雜志》2017年01期

【摘要】：目的建立能穩(wěn)定表達(dá)有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體1(organic anion transporter,OAT1)的馬丁達(dá)比狗腎上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)細(xì)胞轉(zhuǎn)基因細(xì)胞模型,利用該模型初步篩選OAT1的抑制劑。方法采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將質(zhì)粒pcDNA3.1(+)通過(guò)Lipofectamine~(TM)2000轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染MDCK細(xì)胞,并經(jīng)G418篩選獲得陽(yáng)性克隆。通過(guò)OAT1的經(jīng)典底物6-羧基熒光素(6-carboxyfluorescein,6-CFL)在單克隆細(xì)胞內(nèi)的積聚量以及中藥單體存在時(shí)細(xì)胞內(nèi)的積聚量來(lái)檢測(cè)OAT1的活性。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-tinle PCR)檢測(cè)OAT1的mRNA的表達(dá)量。利用穩(wěn)定細(xì)胞株,研究了6-CFL在MDCK-mock和MDCK-OAT1細(xì)胞中的攝取、中藥單體對(duì)6-CFL攝取的抑制特性。結(jié)果 qRT-PCR結(jié)果表明,所建立的MDCK-OAT1細(xì)胞與mock細(xì)胞相比,OAT1 mRNA相對(duì)表達(dá)量為后者的4 862倍,攝取6-CFL的能力為后者的14.9倍。6-CFL在細(xì)胞株中攝取的K_m值為42.36μmol·L~(-1),部分中藥單體能顯著抑制MDCK-OAT1轉(zhuǎn)運(yùn)6-CFL的能力。結(jié)論 OAT1抑制劑篩選模型構(gòu)建成功,并能快速有效地篩選出對(duì)OAT1有潛在抑制作用的中藥單體,為后期的基于OAT1的植物-藥物相互作用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to establish a transgenic cell model of Madin-Darby canine kidneyne MDCK-1 cells which can stably express organic anion transporter (1(organic anion transporter OAT1) in the kidney epithelium of Martin Darby canine, and to screen the inhibitors of OAT1 by using this model. Methods the plasmid pcDNA3.1 () was transfected into MDCK cells by Lipofectamine~(TM)2000 transfection reagent by liposome transfection, and the positive clones were obtained by G418 screening. The activity of OAT1 was determined by the accumulation of 6-carboxyfluorescein (6-carboxyfluorescein 6-CFL) in monoclonal cells and in the presence of traditional Chinese medicine monomers. The mRNA expression of OAT1 was detected by real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR) and quantitative real-tinle PCR. The uptake of 6-CFL in MDCK-mock and MDCK-OAT1 cells and the inhibition of 6-CFL uptake by traditional Chinese medicine monomer were studied by using stable cell lines. Results qRT-PCR results showed that the relative expression of OAT1 mRNA in MDCK-OAT1 cells was 4 862 times higher than that in mock cells. The ability of uptake of 6-CFL was 14.9 times of that of the latter. 6-CFL in the cell line was 42.36 渭 mol / L ~ (-1). Some traditional Chinese medicine monomers could significantly inhibit the ability of MDCK-OAT1 to transport 6-CFL. Conclusion the OAT1 inhibitor screening model was successfully constructed, and it can quickly and effectively screen out Chinese traditional medicine monomers with potential inhibitory effect on OAT1, which provides the experimental basis for the plant-drug interaction based on OAT1 in the later stage.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院廣東省新藥篩選重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014A020210013)
【分類號(hào)】：R94

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本文編號(hào)：1938637