發(fā)布時(shí)間：2018-05-20 16:06

  本文選題：DNA折紙 + 適配體��； 參考：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：DNA納米技術(shù)是一個(gè)新興的、令人興奮的領(lǐng)域,代表著生物醫(yī)學(xué)的前沿領(lǐng)域�；パa(bǔ)堿基對(duì)之間相互作用的特異性使得DNA成為既可編程又具有靈活性的、可構(gòu)建二維或三維結(jié)構(gòu)的材料,即DNA折紙材料。DNA材料獨(dú)特的分子線性結(jié)構(gòu)、自我識(shí)別能力和納米尺度,明顯優(yōu)于傳統(tǒng)的給藥系統(tǒng)�？鼓[瘤藥物阿霉素(DOX)含有蒽環(huán)結(jié)構(gòu),能夠嵌入到DNA雙鏈結(jié)構(gòu)中并形成穩(wěn)定的復(fù)合物,本研究利用DNA折紙的性質(zhì)對(duì)其進(jìn)行修飾,實(shí)現(xiàn)靶向治療、生物作用和化學(xué)治療作用聯(lián)合應(yīng)用的目的,從而提高阿霉素的抗腫瘤作用。研究目的:將環(huán)狀單鏈DNA經(jīng)折紙術(shù)制備成可靶向到淋巴瘤細(xì)胞的DNA矩形片折紙載體,提高阿霉素的抗腫瘤作用,降低其副作用;將具有生物活性的適配體C2NP修飾到折紙載體上,精準(zhǔn)靶向腫瘤部位,載藥后使其同時(shí)發(fā)揮化學(xué)治療作用和生物治療作用。研究方法:用PCR儀將環(huán)狀單鏈DNA(M13mp18)和相應(yīng)的訂書釘單鏈DNA合成DNA矩形片折紙結(jié)構(gòu),利用DNA堿基互補(bǔ)配對(duì)原則將核酸適配體C2NP修飾到矩形片折紙結(jié)構(gòu)上,制備出靶向淋巴瘤細(xì)胞的折紙載體;通過(guò)改變與適配體互補(bǔ)的訂書釘單鏈DNA的數(shù)目和位置以優(yōu)化折紙載體上靶頭的位置和數(shù)目。用凝膠電泳和原子力顯微鏡對(duì)載體進(jìn)行表征,并對(duì)載體的載藥條件進(jìn)行優(yōu)化,確定藥物與載體的最佳孵育濃度比和孵育時(shí)間。用酶標(biāo)儀測(cè)定DOX的熒光強(qiáng)度,對(duì)載藥系統(tǒng)的載藥量及體外釋放情況進(jìn)行考察。使用CCK-8法考察折紙載藥系統(tǒng)對(duì)Karpas 299細(xì)胞的增殖抑制作用、生物療效以及生物治療和化療聯(lián)合作用;用流式細(xì)胞儀和激光共聚焦顯微鏡分析細(xì)胞對(duì)載藥體系的定性、定量攝取以及進(jìn)入細(xì)胞的位置。使用試劑盒考察折紙載藥系統(tǒng)與K299細(xì)胞作用的細(xì)胞凋亡機(jī)制、細(xì)胞周期情況以及細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。研究結(jié)果:構(gòu)建了能夠靶向淋巴瘤細(xì)胞的DNA折紙載體;載體載藥后能夠提高阿霉素的穩(wěn)定性并延緩其釋放,平均每對(duì)堿基對(duì)之間可以插入一個(gè)阿霉素分子,一個(gè)DNA矩形片折紙約載入7000個(gè)阿霉素分子。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,折紙載體對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性,不能夠穿過(guò)細(xì)胞核孔,只能進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。折紙載體載藥后,明顯提高了DOX對(duì)K299細(xì)胞的增殖抑制作用,與細(xì)胞作用2h時(shí),細(xì)胞對(duì)游離阿霉素的攝取量為4.43%,對(duì)連接四個(gè)靶頭和十六個(gè)靶頭的折紙載藥體系的攝取量分別為30.23%和56.84%;在生物治療方面,經(jīng)過(guò)修飾的C2NP靶頭明顯地提高了對(duì)K299細(xì)胞的增殖抑制作用;載藥后,在阿霉素低濃度時(shí),載藥體系同時(shí)表現(xiàn)出對(duì)K299細(xì)胞的生物作用和化療作用,在阿霉素高濃度時(shí),生物作用受到抑制,主要表現(xiàn)為化學(xué)治療作用。作用48h后,與游離阿霉素相比,折紙載藥系統(tǒng)明顯提高了K299細(xì)胞的凋亡率,由37.4%提高到62.1%,同時(shí)提高細(xì)胞內(nèi)的活性氧水平,進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞凋亡。同時(shí),載藥系統(tǒng)能夠阻滯細(xì)胞周期的S期,進(jìn)而使細(xì)胞的分裂增殖受到抑制。研究結(jié)論:本課題成功構(gòu)建了DNA靶向載藥體系,載藥后能夠提高藥物的穩(wěn)定性,延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間,增強(qiáng)藥物的抗腫瘤作用;將適配體修飾到折紙載體上后能夠提高適配體的穩(wěn)定性、降低適配體的作用濃度;且修飾后的載體載藥后能夠同時(shí)發(fā)揮化學(xué)治療作用和生物治療作用。靶向折紙載體及可控制適配體距離和數(shù)目的折紙載體給腫瘤的精準(zhǔn)治療提供了新的研究方法和思路。
[Abstract]:In this paper , we studied the effects of DNA folding on the proliferation inhibition , biological efficacy and biological treatment of the drug - loaded system . The aim of this study was to improve the antitumor effect of adriamycin by modifying the number and the position of the single - stranded DNA . The drug - carrying system has improved the apoptosis rate of K299 cells at the high concentration of adriamycin . The drug - carrying system can improve the stability of the drug , prolong the drug action time and enhance the anti - tumor effect of the drug .
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R943;R96

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Wanqing Chen;;Cancer statistics: updated cancer burden in China[J];Chinese Journal of Cancer Research;2015年01期

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本文編號(hào)：1915334