本文選題：成纖維細(xì)胞生長因子受體 + 慢病毒包裝�。� 參考：《中國醫(yī)藥工業(yè)雜志》2017年01期

【摘要】：構(gòu)建含有成纖維細(xì)胞生長因子受體蛋白2(FGFR2)基因序列的重組慢病毒表達(dá)載體,與慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞293T,獲得過表達(dá)FGFR2的重組病毒顆粒;用重組病毒顆粒感染人胚腎細(xì)胞(HEK)293細(xì)胞,并用嘌呤霉素(20?g/ml)進(jìn)行篩選,最終獲得過表達(dá)FGFR2的重組細(xì)胞株。蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot)試驗(yàn)結(jié)果顯示,該重組細(xì)胞株與空白對(duì)照HEK293細(xì)胞相比能高表達(dá)FGFR2,實(shí)時(shí)熒光定量核苷酸擴(kuò)增試驗(yàn)(QPCR)和酶聯(lián)免疫反應(yīng)(ELISA)檢測(cè)結(jié)果表明FGFR2蛋白下游相關(guān)通路的u PA等分子的轉(zhuǎn)錄和分泌水平上調(diào),克隆形成試驗(yàn)也證實(shí)重組HEK293細(xì)胞促增殖能力增強(qiáng)。結(jié)果表明,該重組過表達(dá)FGFR2的細(xì)胞模型可用于下一步的功能研究以及靶向FGFR2藥物的篩選。
[Abstract]:Recombinant lentivirus expression vector containing fibroblast growth factor receptor protein 2 (FGFR2) gene sequence was constructed and co-transfected with lentivirus packaging plasmid into packaging cells 293T to obtain recombinant viral particles that overexpressed FGFR2. Recombinant virus particles were used to infect human embryonic kidney cells (HEC) and purified by purine mycin 20 g / ml. Finally, recombinant cell lines expressing FGFR2 were obtained. Western blot assay showed that, Compared with the control HEK293 cell line, the recombinant cell line could express FGFR2.The results of real-time fluorescence quantitative nucleotide amplification assay and Elisa showed that the transcription and secretion level of UPA and other molecules related to downstream pathway of FGFR2 protein were up-regulated. Clone formation assay also confirmed that the proliferation of recombinant HEK293 cells was enhanced. The results showed that the recombinant FGFR2 overexpression cell model could be used for further functional studies and screening of targeted FGFR2 drugs.
【作者單位】： 暨南大學(xué)生物醫(yī)藥研究院 暨南大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)系 基因工程藥物國家工程研究中心 廣東省生物工程藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81472337) 廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2016A020217012) 廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2016201604030039)
【分類號(hào)】：R96

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4 金e，

本文編號(hào)：1913045