發(fā)布時間：2018-05-17 21:03

  本文選題：重組艾塞那肽-人血清白蛋白融合蛋白 + 藥代動力學　； 參考：《泰山醫(yī)學院》2014年碩士論文

【摘要】：目的： 重組艾塞那肽-人血清白蛋白融合蛋白(E2HSA)臨床前藥代動力學研究。 方法： 建立化學發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測法(CLEIA)測定獼猴血清中E2HSA的濃度并對其進行方法學確證；研究E2HSA在大鼠和獼猴體內(nèi)的藥代動力學特征；采用放射性同位素125I標記法對E2HSA在大鼠體內(nèi)的組織分布和排泄特點進行研究。 結(jié)果： 1.測定生物樣品中藥物濃度的ELISA分析方法建立與確證 該方法可特異性地識別E2HSA的抗原表位，在2~200ng·mL-1的濃度范圍時與血清中其它物質(zhì)無明顯交叉反應。方法學確證表明標準品E2HSA在2~200ng·mL-1濃度范圍內(nèi)，吸光度與濃度呈依賴關(guān)系，四參數(shù)Logistic擬合：Y（OD值）=A2＋(A1-A2)/(1+(X/X0)^P)，相關(guān)系數(shù)r均大于0.99，最低定量限為2ng·mL-1。批間和批內(nèi)精密度為1.3~8.1%，準確度為-3.6~2.3%。樣品在-20℃放置3個月穩(wěn)定性良好，儲備液在-20℃放置7天穩(wěn)定性良好，稀釋1000倍無稀釋效應。該分析方法能夠滿足E2HSA臨床前藥代動力學研究。 2. Wistar大鼠、獼猴皮下注射E2HSA的藥代動力學研究 Wistar大鼠單次皮下注射1.98mg·kg-1E2HSA后， E2HSA在大鼠體內(nèi)消除半衰期t1/2為：12.2±1.2h，平均滯留時間MRTlast為：34.9±1.9h；血漿清除率CL為：19.1±5.6mL·h-1·kg-1，表觀分布容積Vd為：381.4±50.7mL·kg-1，AUClast為91652.8±8119.1ng·h·mL-1。獼猴單次皮下注射0.3、0.9和2.7mg·kg-1E2HSA后，E2HSA在獼猴體內(nèi)消除半衰期t1/2依次為：53.4±8.0h、50.9±9.1h、56.8±8.1h，三個劑量組間沒有統(tǒng)計學差異；平均滯留時間MRTlast依次為：78.3±6.2h、89.0±7.6h、83.3±7.7h；消除速率常數(shù)ke依次為：0.013±0.003、0.014±0.003、0.015±0.006；血漿清除率CL依次為：1.66±0.27mL·h-1·kg-1、1.39±0.15mL·h-1·kg-1、1.36±0.12mL·h-1·kg-1，低劑量組和中劑量組有統(tǒng)計學差異，中劑量組合高劑量組沒有統(tǒng)計學差異，低劑量組和高劑量組有統(tǒng)計學差異；表觀分布容積Vd依次為：125.5±8.8mL·kg-1、103.8±28.4mL·kg-1、110.4±12.2mL·kg-1三個劑量組間沒有統(tǒng)計學差異；AUClast依次為179182±27148ng·h·mL-1，630956±68878ng·h·mL-1，1928196±168615ng·h·mL-1（比例1：3.5：10.8），低、中和高給藥劑量比為1：3：9，AUClast與給藥劑量基本呈等比例增加。 獼猴皮下注射0.9mg·kg-1E2HSA每周1次，連續(xù)5次給藥后，5只獼猴的蓄積因子（R）分別為0.91、1.07、0.80、0.62和0.63，，平均蓄積因子0.81±0.19。 獼猴皮下注射2.7mg·kg-1E2HSA對靜脈注射0.9mg·kg-1E2HSA的生物利用度為81.9%。 3. Wistar大鼠皮下注射125I-E2HSA的組織分布和排泄研究 組織分布結(jié)果可見2h活殺后各組織的藥物濃度順序為：血清肺胃內(nèi)容物腎脊髓小腸內(nèi)容物腎上腺胃卵巢心膀胱輸精管肝脾胰腺皮膚小腸骨骼子宮輸卵管大腸胸腺睪丸腦肌肉大腸內(nèi)容物脂肪。8h活殺后各組織的藥物濃度順序為：血清肺腎上腺腎胃內(nèi)容物卵巢胃小腸內(nèi)容物輸卵管心輸精管肝小腸脾脊髓膀胱睪丸子宮皮膚胰腺大腸骨骼脂肪胸腺腦肌肉大腸內(nèi)容物。24h活殺后各組織的藥物濃度順序為：血清胃內(nèi)容物皮膚肺膀胱胃輸卵管腎卵巢輸精管小腸大腸內(nèi)容物腎上腺心子宮肝睪丸脾小腸內(nèi)容物大腸骨骼胰腺脂肪脊髓胸腺肌肉腦。96h活殺后各組織的藥物濃度順序為：胃內(nèi)容物膀胱血清大腸內(nèi)容物腦皮膚肺腎腎上腺輸精管肝胃卵巢小腸內(nèi)容物輸卵管子宮脊髓心小腸脾大腸胰腺睪丸骨骼胸腺肌肉脂肪。 雄性Wistar大鼠在皮下給予125I-E2HSA（1.98mg·kg-1）后，0~144h內(nèi)從膽汁排泄的藥物量占總給藥量的3.97±1.29%。0~432h內(nèi)從尿液排泄的藥物量占總給藥量的62.86±10.47%。0~432h內(nèi)從糞便中排泄的藥物量占總給藥量為14.47±4.37%，代謝籠沾染回收到總給藥量的2.83%±0.63%。 結(jié)論： 1.測定生物樣品中藥物濃度的ELISA分析方法建立與確證 建立了簡單、靈敏、快速、可靠、特異性強的E2HSA全長藥物檢測方法，方法的特異性，準確度和精密度良好，符合生物分析方法指導原則要求。 2. Wistar大鼠、獼猴皮下注射E2HSA的藥代動力學研究 E2HSA在獼猴體內(nèi)消除半衰期t1/2三個劑量組間沒有統(tǒng)計學差異；AUClast比例1：3.5：10.8，低、中和高給藥劑量比為1：3：9，AUClast與給藥劑量基本呈等比例增加，顯示在0.3mg·kg-1~2.7mg·kg-1的劑量范圍內(nèi)E2HSA在獼猴體內(nèi)的血清藥物濃度呈線性動力學變化。 獼猴皮下注射0.9mg·kg-1E2HSA每周1次，連續(xù)5次給藥后，平均蓄積因子0.81±0.19，提示皮下注射0.9mg·kg-1E2HSA每周1次，連續(xù)5次后獼猴體內(nèi)血藥濃度不會積聚增加，其中部分獼猴血藥濃度會降低，推測可能有抗體產(chǎn)生。 獼猴皮下注射2.7mg·kg-1E2HSA的絕對生物利用度為81.9%，說明皮下注射可能是一種較為快速、方便、有效的用藥途徑。 3. Wistar大鼠皮下注射125I-E2HSA的組織分布和排泄研究 Wistar大鼠在皮下給予125I-E2HSA（1.98mg·kg-1）后，分別于2h、8h、24h、96h動物活殺后各組織酸沉后放射性結(jié)果顯示：腎臟中藥物含量一直較高，提示經(jīng)尿排泄是一個主要的排泄途徑；藥物在脂肪、肌肉和腦組織中含量一直較低，說明E2HSA不易于進入脂性強的組織且不易透過血腦屏障；胃腸道中的含量一直較高，可能因為蛋白分解代謝中的堿性片段透過胃壁分泌到胃腸內(nèi)容物中。 膽汁、糞尿排泄結(jié)果顯示：糞便、尿液和代謝籠沾染共回收到總給藥量的80.16%，說明125I-E2HSA給藥后主要經(jīng)尿排出體外。
[Abstract]:Objective:
Preclinical pharmacokinetics of recombinant human isserin human serum albumin fusion protein (E2HSA).
Method錛

本文編號：1902855